“溶栓之王”——蚓激酶下游纯化工艺解决方案

蚓激酶（Lumbrukinase）是由人工养殖的赤子爱胜蚓中提取分离而得的酶复合物，为微黄色粉末。此品属两种类型酶，即纤维蛋白溶酶原激活物（PIasminogen Activator）和纤维蛋白溶酶（Plasminogen）；其中还有类似组织型纤维蛋白溶酶原激活物（t—PA）的成份。

图1：蚓激酶蛋白质三维结构示意图（2003年我国科学家率先测定的蚓激酶蛋白质三维结构，蚓激酶的三维结构，从而为在分子层面上了解这一蛋白药物开启了大门。这不仅为进一步的药物设计奠定基础，也使蚓激酶成为我国最早被测定三维结构的蛋白药物之一。新华社照片）

蚓激酶是从特种蚯蚓中提取的蛋白水解酶，它是一种多分子重组生物制剂，与血栓（纤维蛋白）有特殊的亲和力，能够跟踪溶栓，有效溶解微栓，能有效溶解已沉积在动脉血管内皮而导致动脉粥样硬化的脂质斑块，改善微循环，加强心、脑血管侧支循环，因此被生物医学界称之为“溶栓之王”。

经过反复药理实验和论证，国内外科学家已明确证实蚓激酶具备以下主要功效：

1、开放性修复血管受损内皮细胞，增加血管弹性，改善血管供氧功能；

2、降低血液粘度，降低血小板聚集率，抑制血栓再次形成

3、有降压作用，可用于治疗高血压病。对原发性高血压明确有效，广泛应用于治疗冠心病、脑梗塞、糖尿病和肾病综合症等

4、缓解风湿性关节炎和中风后遗症，治疗下肢深静脉血栓。修复血栓发生后周边坏死脑细胞，挽救半暗区。

5、有效抑制辅酶A（HMG-CoA）的活性，抑制人体内部合成胆固醇数量，从而达到降血脂的效果。

蚓激酶有多种同工酶，不同的分离方法得到的组分有一定差异，蚓激酶的制备大致为：清洗，磨浆、除渣、超滤、盐析（粗品）、粗品溶解、层析纯化，除盐，灭菌等步骤。

蚓激酶下游纯化工艺解决方案：

蚓激酶属于酸性丝氨酸蛋白酶类，酸性蛋白可以用琼脂糖阴离子交换层析DEAE Seplife FF或者聚合物阴离子交换层析 Seplife LXPM DEAE 5504M进行分离纯化，同时其丝氨酸蛋白酶化学属性使其可以用Benzamidine Seplife 4FF进行亲和层析纯化，其硫酸氨盐析后的粗品溶解后，也可用疏水层析Phenyl Seplife FF进行疏水层析纯化，痕量的杂质可通过凝胶过滤层析Seplife S-200去除。

蚓激酶纯化常用填料：

DEAE Seplife FF/Seplife LXPM DEAE 5504M:可替代文献中的DEAE-纤维素，粗品蚓激酶溶解后，用此离心交换层析吸附洗脱模式纯化蚓激酶。

Benzamidine Seplife 4FF：亲和层析纯化蚓激酶，对于不同的同工酶亲和力有所差异。

Phenyl Seplife FF：盐析的粗品蚓激酶溶解后，无需脱盐处理，直接用疏水层析进行精细纯化。

Seplife S-200：纯化最后阶段，痕量的杂质的去除。

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