超高纯度蛇毒降纤酶纯化工艺分享

降纤酶临床上主要用于急性脑梗死,包括脑血栓、脑栓塞,短暂性脑缺血发作(TIA)以及脑梗死再复发的预防等疾病，是唯一能直接作用于血浆中的纤维蛋白原及血栓的纤维蛋白网结构的蛇毒制剂，同时通过分解纤维蛋白网结构暴露与纤溶酶原的结合位点，加速体内纤溶酶的活化，纤溶酶能溶解血栓改变血栓结构，降低血栓抗性，产生新的代谢产物正反馈地促进纤溶酶的活化，加速血栓溶解。

降纤酶采用血毒为初始原料，经离子交换层析，亲和层析，凝胶过滤层析制备而成。

降纤酶下游纯化工艺解决方案：

降纤酶属于酸性丝氨酸蛋白酶类，酸性蛋白可以用琼脂糖阴离子交换层析DEAE Seplife FF或者葡聚糖离子交换层析DEAE Seplife A50进行分离纯化，也可采用阳离子交换层析SP Seplife FF进行初步纯化，同时其丝氨酸蛋白酶化学属性使其可以用Benzamidine Seplife 4FF进行亲和层析纯化，单组分可采用凝胶过滤层析Seplife Sunport 75填料进行分离。

蚓激酶纯化常用填料：

DEAE Seplife FF/DEAE Seplife A50 :用于从蛇毒中初步纯化降纤酶。

Benzamidine Seplife 4FF：亲和层析纯化降纤酶，对于不同的品种的蛇毒降纤酶亲和力有所差异。

SP Seplife FF：用于蛇毒降纤酶初步分离纯化。

Seplife Sunport 75：纯化最后阶段，单组分降纤酶的分离纯化。

纯化案例：

原料：五步蛇蛇毒

纯化填料：SP Seplife FF(粗纯）+Benzamidine Seplife 4FF(精纯）

层析过程及缓冲液：联系蓝晓科技0512-65160522

纯化色谱图及电泳图

SP Seplife FF纯化结果

Benzamidine Seplife 4FF纯化结构

纯化结果：五步蛇毒中降纤酶的提纯，可以通过一步SP Seplife FF 离子交换富集降纤酶去除蛇毒中大多数的杂质的目的，富集后的样品通过Benzamidine 4FF亲和纯化可以达到95%以上的纯度，整个工艺方法稳定，降纤酶回收收率达到80%以上，工艺方法总体相对简单且可以实现工业化放大生产，远高于行业标准。

更多关于降纤酶下游工艺解决方案或纯化层析填料，请联系蓝晓科技：0512-65160522

1. 从蛇毒中提取降纤酶的制备方法。专利公开号：CN1597945A