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溶瘤病毒——重组腺病毒
溶瘤病毒疗法（Oncolytic Virus, OV）是基于病毒在肿瘤中的感染和复制来杀死肿瘤细胞的免疫疗法，其在复制高效性、肿瘤靶向性佳、肿瘤杀伤途径多、不良反应小等多方面仍具有明显优势。
腺病毒（adenovirus， AdV）是一种无包膜的双链 DNA 病毒，进入细胞后在细胞核中表达病毒复制所必需的基因 E1A 和E1B。E1A 和 E1B 能调节视网膜母细胞瘤相关蛋白（retinoblastoma-associated protein，pRb）和 p53 信号转导通路，促进宿主细胞的分裂和增殖，从而实现在细胞内大量复制。因此，缺失 E1A 和 E1B 基因可构建特异性感染 pRb/p53 突变型肿瘤的溶瘤病毒。
已有多个国家批准在临床肿瘤治疗中使用AdV，涉及多种实体瘤，如用于头颈部肿瘤治疗的重组Ad-p53，联合化学治疗药物治疗晚期鼻咽癌的重组溶瘤Ad（H101，oncorine®）。
溶瘤病毒——重组AdV下游纯化工艺解决方案
AdV制备工艺
AdV多用HEK293细胞悬浮培养大规模培养制备，收集细胞后用去污剂Tween20.Tween80.Triton X-100等破碎细胞，或者通过冻融的方式破碎细胞，破碎后可以测定病毒滴度，保证病毒全部释放出来；裂解后加入核酸酶（BenzoNuclease）剪切HC-DNA,HC-RNA降低粘度，之后离心去除细胞碎片等固形物，在经MF等进行澄清处理，澄清可采用UF/DF+Seplife 4FF的纯化模式，也可采用阴离子交换Q Large Scale捕获及初步纯化，在用多模式层析填料Seplife Suncore 700流穿模式进行精细纯化，纯化后UF/DF置换缓冲液并调整浓度，后经除菌过滤并制剂化制备而成。
1.细胞培养，收集细胞，裂解细胞，固液分离，澄清处理，UF/DF等：略
2.层析纯化：澄清的病毒溶液先用阴离子交换层析填料Q Large Scale进行初步纯化并减少体积富集病毒，去除大量的HCP及HC-DNA，HC-RNA等杂质，初步纯化后在用多模式层析Seplife Suncore 700填料进行流穿模式纯化。
壳层技术多模式层析介质，是蓝晓科技自主研发的一种新型多模式琼脂糖层析介质，用于病毒等生物大分子的中度纯化和精细纯化。该层析介质运用新型壳层微球技术及辛胺配基，具有凝胶过滤和吸附分离双重功能。核心功能区键合强吸附配体辛胺，以静电力及疏水作用力在宽泛的pH和离子强度下结合分子，同时核心功能区外层有约5um的壳层，壳层上有700 KDa / 400 KDa的空隙和核心功能区连通。新型壳层微球技术可有效捕获污染物，同时使目标分子流穿。Seplife Suncore 700 / 400层析介质具有高流速、低反压、高处理量、良好的化学稳定性和机械性等特点，方便进行规模放大，可缩短生产时间，提高生产效率。澄清的溶液流经柱床时，大于700 KDa / 400 KDa的生物分子被排阻在壳层外面，通过外水体积流穿，而小于700 KDa / 400 KDa的生物分子通过壳层的空隙进入核心功能区，并结合在核心中，从而在较高流速及较大上样量的状态，依然能超大生物分子和其它生物分子的分离。
图3：壳层技术多模式层析介质结构示意图（蓝晓科技）
扫码免费申请试用装3.除菌过滤，制剂化：略。
参考资料
1.Tazawa H, Hasei J, Yano S, et al. Bone and soft-tissue sarcoma: a new target for telomerase-specific oncolytic virotherapy[J]. Cancers (Basel), 2020, 12(2): 478. DOI: 10.3390/cancers12020478.
2.Sanchala D S, Bhatt L K, Prabhavalkar K S. Oncolytic herpes simplex viral therapy: a stride toward selective targeting of cancer cells[J]. Front Pharmacol, 2017, 8: 270. DOI: 10.3389/fphar.2017.00270.
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