最近AAPS的ADC工作组出了一版更新的生物分析白皮书，距离2013年那版位置文件，一晃十多年过去了。这篇文章集结了100多位来自药企、CRO和监管机构的专家，把这些年行业积累的经验和共识做了一次系统梳理。
一、先搞清楚：ADC为什么要测这么多东西？
ADC这个分子天生就复杂——抗体骨架上挂着小分子payload，连接子有的可切割有的不可切割，进了体内之后DAR还会动态变化。所以单一分析方法根本说不清楚全貌，必须配套一整套检测。
?简单说，体内循环的ADC不是一个均一的东西，而是一堆DAR从0到N的混合体。
二、四大分析物，各有各的测法
1. 总抗体（tAb）测的是所有循环中的抗体形态，不管带不带payload。LBA和LC-MS/MS都能做。
2. 结合型ADC的检测分两种思路：
「结合payload法」——捕获端抓所有抗体，检测端针对payload出信号。
「结合抗体法」——反过来，用抗payload做捕获，抗Fc或抗ID做检测。
3. 游离payload
游离payload的浓度通常很低，但因为payload本身毒性极强（IC50经常在pM到nM级别），微小的浓度波动都可能影响安全性判断。
4. DAR分布
DAR这个事，监管目前不强制要求每个DAR物种的数据，但做了肯定有用。
最常用的是平均DAR，公式很直接：ADC浓度 / tAb浓度 × 初始DAR。跟踪给药后平均DAR的变化趋势，就能判断连接子稳不稳定，早期发现阶段用来排序化合物很好用。
三、两个绕不开的干扰因素
免疫原性（ADA）
实际临床数据看，ADC的免疫原性并没有比常规治疗蛋白更高，可能和肿瘤患者基线免疫状态受化疗影响有关。
可溶性靶标干扰
如果靶抗原会脱落或分泌到循环里，就会和ADC结合形成复合物，影响检测结果，也可能影响药效。FDA的指导原则说，这种情况下最好能区分游离ADC和结合靶标的ADC。
测游离靶标挺有技术含量的——捕获抗体的亲和力不能比ADC本身高太多，不然会把复合物里的靶标拽出来，导致结果偏高。孵育时间、稀释倍数都得小心控制。很多时候给药后ADC浓度远高于游离靶标，循环里几乎没有游离靶标，测了也没什么生物学意义。
总靶标检测相对简单，但需要酸解离前处理把结合的靶标释放出来。LBA做不出来的话，也可以考虑LC-MS/MS。
引用来源：
Shen JX, et al. Updated Recommendations for the Bioanalysis of Antibody–Drug Conjugates (ADC) from the ADC working group of the AAPS Bioanalytical Community. The AAPS Journal. 2026;28:121.
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