1.试剂与仪器与耗材
1.1仪器：低温离心机、电泳仪、转膜仪、化学发光成像系统、酶标仪、涡旋振荡器、恒温水浴锅、超净工作台
1.2耗材：1.5mL 离心管、EP 管、SDS-PAGE 凝胶制胶板、梳子（10 孔 / 15 孔）、NC膜（0.45μm，小分子蛋白用；0.22μm，大分子蛋白用）、滤纸（与胶 / 膜同尺寸）、一次性手套、移液枪头（10μL/200μL/1mL）
2.实验步骤
2.1细胞样本处理：收集对数期细胞，加入150-200μL RIPA 裂解液（含蛋白酶 / 磷酸酶抑制剂），冰上裂解 30min，期间涡旋振荡 3-4 次；4℃离心，吸取上清至新的预冷 EP 管，即为总蛋白样本。
2.2组织样本处理：取新鲜组织剪碎后加入 1mL RIPA 裂解液（含抑制剂），冰浴下匀浆，冰上静置 30min，4℃离心20min，吸取上清至新 EP 管。
2.3蛋白定量（BCA 法）
2.4蛋白样本变性
样本：5X上样缓冲液 = 4:1；按比例混合成1X工作液
煮沸使蛋白变性，冷却后 4℃保存（短期）或 - 20℃保存（长期）。
2.5上样与电泳：
设计加样顺序，作好实验记录，按预定顺序加样一般10孔胶的每个电泳道加样最大体积为25µl，每个电泳道上样的最低蛋白质量：0.1µg-2ng，最高蛋白质量：20-40µg。把电泳装置与电源连接好，电子由负极流向正极，形成电路循环。电泳条件建议：浓缩胶 80V，30min（溴酚蓝进入分离胶）；分离胶 120V，60-90min（溴酚蓝到达胶底 1cm 处停止），具体时间以蛋白大小而定。
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1.1仪器：低温离心机、电泳仪、转膜仪、化学发光成像系统、酶标仪、涡旋振荡器、恒温水浴锅、超净工作台
1.2耗材：1.5mL 离心管、EP 管、SDS-PAGE 凝胶制胶板、梳子（10 孔 / 15 孔）、NC膜（0.45μm，小分子蛋白用；0.22μm，大分子蛋白用）、滤纸（与胶 / 膜同尺寸）、一次性手套、移液枪头（10μL/200μL/1mL）
2.实验步骤
2.1细胞样本处理：收集对数期细胞，加入150-200μL RIPA 裂解液（含蛋白酶 / 磷酸酶抑制剂），冰上裂解 30min，期间涡旋振荡 3-4 次；4℃离心，吸取上清至新的预冷 EP 管，即为总蛋白样本。
2.2组织样本处理：取新鲜组织剪碎后加入 1mL RIPA 裂解液（含抑制剂），冰浴下匀浆，冰上静置 30min，4℃离心20min，吸取上清至新 EP 管。
2.3蛋白定量（BCA 法）
2.4蛋白样本变性
样本：5X上样缓冲液 = 4:1；按比例混合成1X工作液
煮沸使蛋白变性，冷却后 4℃保存（短期）或 - 20℃保存（长期）。
2.5上样与电泳：
设计加样顺序，作好实验记录，按预定顺序加样一般10孔胶的每个电泳道加样最大体积为25µl，每个电泳道上样的最低蛋白质量：0.1µg-2ng，最高蛋白质量：20-40µg。把电泳装置与电源连接好，电子由负极流向正极，形成电路循环。电泳条件建议：浓缩胶 80V，30min（溴酚蓝进入分离胶）；分离胶 120V，60-90min（溴酚蓝到达胶底 1cm 处停止），具体时间以蛋白大小而定。
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