western blot基本流程来啦～wb一般流程
1⃣️蛋白样品制备，把具有空间结构的蛋白样品变性成线性，用SDS加热变性。
2⃣️电泳，变性后的蛋白进行聚丙烯酰胺凝胶电泳，在浓缩胶中80v压成一条线后，，调电压120v，蛋白质由于分子量不同而分开，小蛋白跑得快先到底部，⚠️注意不要让样品跑出去。
3⃣️转膜，将胶上的蛋白固定到pvdf膜或者nc膜上，⚠️黑胶红膜，确定胶，膜和滤纸之间没有气泡，250mA,95min（具体时间依据目的蛋白大小而定）,该项操作由于产热较大，为防止胶化，转膜槽在冰浴中进行。
4⃣️封闭，用5%的BSA或者脱脂牛奶或者商品化的blocking封闭膜减少非特异性结合。具体封闭液也要依据抗体选择和实验情况。
5⃣️一抗孵育膜上的蛋白，一抗有单克隆抗体，多克隆抗体等抗体，一般单克隆抗体特异性好。稀释比例参考抗体说明书（1%BS A或商品化的blocking稀释），4度，摇床过夜孵育。
6⃣️孵育二抗，1xtbst，5分钟每次，洗三遍，洗掉多余的一抗，然后孵育二抗，避光室温1h。然后1xtbst洗掉多余二抗，曝光。#医学 #医学SCI #SCI论文 #保姆级教程 #科研学习 #oc #医学实验 #科研 #生命科学#sci
1⃣️蛋白样品制备，把具有空间结构的蛋白样品变性成线性，用SDS加热变性。
2⃣️电泳，变性后的蛋白进行聚丙烯酰胺凝胶电泳，在浓缩胶中80v压成一条线后，，调电压120v，蛋白质由于分子量不同而分开，小蛋白跑得快先到底部，⚠️注意不要让样品跑出去。
3⃣️转膜，将胶上的蛋白固定到pvdf膜或者nc膜上，⚠️黑胶红膜，确定胶，膜和滤纸之间没有气泡，250mA,95min（具体时间依据目的蛋白大小而定）,该项操作由于产热较大，为防止胶化，转膜槽在冰浴中进行。
4⃣️封闭，用5%的BSA或者脱脂牛奶或者商品化的blocking封闭膜减少非特异性结合。具体封闭液也要依据抗体选择和实验情况。
5⃣️一抗孵育膜上的蛋白，一抗有单克隆抗体，多克隆抗体等抗体，一般单克隆抗体特异性好。稀释比例参考抗体说明书（1%BS A或商品化的blocking稀释），4度，摇床过夜孵育。
6⃣️孵育二抗，1xtbst，5分钟每次，洗三遍，洗掉多余的一抗，然后孵育二抗，避光室温1h。然后1xtbst洗掉多余二抗，曝光。#医学 #医学SCI #SCI论文 #保姆级教程 #科研学习 #oc #医学实验 #科研 #生命科学#sci
