1.样品处理：
a.对于细胞：
(a)缓慢吸去细胞培养液，PBS洗涤1次。
(b)加入4%多聚甲醛固定液固定10分钟，PBS漂洗2次。
b.对于冰冻切片：
取出预制好并保存于-20℃的冰冻切片，放入切片架回温5-10分钟。
c.对于骨髓涂片和血涂片：
(a)取少许样品置于载玻片上，将推玻片与载玻片保持30°角，用推玻片将骨髓推匀于玻片表面，最好制稍厚一点的涂片。将涂片在空气中自然干燥或吹干。
(b)选做：用4%多聚甲醛固定液固定10分钟，固定后蒸馏水漂洗2次。
2.油红O染色工作液的配制。
根据样品数量及每个样品所需的染色工作液的体积，按照油红O溶液和油红O稀释液3:2的比例配制油红O染色工作液，例如需配制5ml油红O染色工作液，则取3ml油红O溶液和2ml油红O稀释液，混匀，静置10分钟，然后0.45µm针头滤器过滤，两小时内使用。
3.油红O染色。
a.对于细胞：
(a)加入适量染色洗涤液覆盖细胞20秒。
(b)吸除染色洗涤液，加入适量油红O染色工作液，染色10-20分钟。
注1：染液体积均匀覆盖细胞即可，以6孔板为例，可加入1ml染色工作液。
注2：可适当延长染色时间，但不要超过1小时。
(c)去除油红O染色工作液，加入适量染色洗涤液，静置30秒，然后去除染色洗涤液，用PBS洗涤20秒。
(d)选做：可用苏木素染色液(C0107)进行细胞核的复染。
(e)加入适量PBS，均匀覆盖细胞即可，显微镜下观察和拍照。
b.对于冰冻切片、骨髓涂片和血涂片：
(a)加入适量染色洗涤液覆盖样品20秒。
(b)吸除染色洗涤液，将配制好的油红O染色工作液滴加于切片上，或直接将切片浸入染色工作液中，染色10-20分钟。
注：可适当延长染色时间，但不宜超过1小时。
(c)去除油红O染色工作液，将适量染色洗涤液滴加于切片上，静置30秒，然后去除染色洗涤液，浸入蒸馏水中置于摇床洗涤20秒。
(d)选做：可用苏木素染色液(C0107)进行细胞核的复染。
(e)染色完成后可以直接观察和配制。也可以使用水性封片液封片，推荐使用碧云天的抗荧光淬灭封片液(P0126)，然后镜下观察和拍照。#细胞实验 #生信分析#提供思路创新 #实验设计#研究热点#选题推荐#
a.对于细胞：
(a)缓慢吸去细胞培养液，PBS洗涤1次。
(b)加入4%多聚甲醛固定液固定10分钟，PBS漂洗2次。
b.对于冰冻切片：
取出预制好并保存于-20℃的冰冻切片，放入切片架回温5-10分钟。
c.对于骨髓涂片和血涂片：
(a)取少许样品置于载玻片上，将推玻片与载玻片保持30°角，用推玻片将骨髓推匀于玻片表面，最好制稍厚一点的涂片。将涂片在空气中自然干燥或吹干。
(b)选做：用4%多聚甲醛固定液固定10分钟，固定后蒸馏水漂洗2次。
2.油红O染色工作液的配制。
根据样品数量及每个样品所需的染色工作液的体积，按照油红O溶液和油红O稀释液3:2的比例配制油红O染色工作液，例如需配制5ml油红O染色工作液，则取3ml油红O溶液和2ml油红O稀释液，混匀，静置10分钟，然后0.45µm针头滤器过滤，两小时内使用。
3.油红O染色。
a.对于细胞：
(a)加入适量染色洗涤液覆盖细胞20秒。
(b)吸除染色洗涤液，加入适量油红O染色工作液，染色10-20分钟。
注1：染液体积均匀覆盖细胞即可，以6孔板为例，可加入1ml染色工作液。
注2：可适当延长染色时间，但不要超过1小时。
(c)去除油红O染色工作液，加入适量染色洗涤液，静置30秒，然后去除染色洗涤液，用PBS洗涤20秒。
(d)选做：可用苏木素染色液(C0107)进行细胞核的复染。
(e)加入适量PBS，均匀覆盖细胞即可，显微镜下观察和拍照。
b.对于冰冻切片、骨髓涂片和血涂片：
(a)加入适量染色洗涤液覆盖样品20秒。
(b)吸除染色洗涤液，将配制好的油红O染色工作液滴加于切片上，或直接将切片浸入染色工作液中，染色10-20分钟。
注：可适当延长染色时间，但不宜超过1小时。
(c)去除油红O染色工作液，将适量染色洗涤液滴加于切片上，静置30秒，然后去除染色洗涤液，浸入蒸馏水中置于摇床洗涤20秒。
(d)选做：可用苏木素染色液(C0107)进行细胞核的复染。
(e)染色完成后可以直接观察和配制。也可以使用水性封片液封片，推荐使用碧云天的抗荧光淬灭封片液(P0126)，然后镜下观察和拍照。#细胞实验 #生信分析#提供思路创新 #实验设计#研究热点#选题推荐#
