线粒体DNA检测方法（图10文字版）
实验步骤：
1️⃣接种细胞到6孔板中，37℃、5% CO2培养箱中过夜培养?
2️⃣待细胞密度达到60-70%✅ 转染/加药处理细胞，处理48H（根据个人实验而定）
3️⃣每管加入配好的 500ul 样本裂解液 和 100ul 蛋白酶K
4️⃣55℃，加热 6-12h
5️⃣将DNA 提取液和上述裂解液体积按1:1加入‼️
6️⃣12000 rpm，30min，收上清
7️⃣加入上清体积1/10的 3M乙酸钠?
8️⃣再加入2.5倍体积的无水乙醇?
9️⃣混匀，室温静置 10min。
1️⃣0️⃣12000 rpm,30min，弃去上清
1️⃣1️⃣加入80%乙醇室温静置5 min
1️⃣2️⃣12000 rpm,5 min 离心，弃沉淀
1️⃣3️⃣加入蒸馏水溶解，测定浓度✅
1️⃣4️⃣进行PCR检测?（mt ND1,GAPDH为引物）
——————实验原理?✨
利用PCR扩增的原理，通过比较线粒体基因和参考基因扩增产物达到某一荧光强度阈值时的循环扩增次数（Ct值），计算线粒体基因与参考基因拷贝数之比，从而得出相对mtDNA，即每个细胞内所含mtDNA拷贝数。
常用的参考基因包括ACTB（beta-actin）、HGB（beta-globin）、RPLP0等
常用的线粒体基因主要有ND1（NADH dehydrogenase 1）、ND2、MTF3212/R3319等。
#线粒体 #线粒体DNA #线粒体DNA检测#科研日常 #科研学习 #细胞实验 #生物实验 #qpcr实验 #线粒体与衰老 #爱上工作的瞬间
实验步骤：
1️⃣接种细胞到6孔板中，37℃、5% CO2培养箱中过夜培养?
2️⃣待细胞密度达到60-70%✅ 转染/加药处理细胞，处理48H（根据个人实验而定）
3️⃣每管加入配好的 500ul 样本裂解液 和 100ul 蛋白酶K
4️⃣55℃，加热 6-12h
5️⃣将DNA 提取液和上述裂解液体积按1:1加入‼️
6️⃣12000 rpm，30min，收上清
7️⃣加入上清体积1/10的 3M乙酸钠?
8️⃣再加入2.5倍体积的无水乙醇?
9️⃣混匀，室温静置 10min。
1️⃣0️⃣12000 rpm,30min，弃去上清
1️⃣1️⃣加入80%乙醇室温静置5 min
1️⃣2️⃣12000 rpm,5 min 离心，弃沉淀
1️⃣3️⃣加入蒸馏水溶解，测定浓度✅
1️⃣4️⃣进行PCR检测?（mt ND1,GAPDH为引物）
——————实验原理?✨
利用PCR扩增的原理，通过比较线粒体基因和参考基因扩增产物达到某一荧光强度阈值时的循环扩增次数（Ct值），计算线粒体基因与参考基因拷贝数之比，从而得出相对mtDNA，即每个细胞内所含mtDNA拷贝数。
常用的参考基因包括ACTB（beta-actin）、HGB（beta-globin）、RPLP0等
常用的线粒体基因主要有ND1（NADH dehydrogenase 1）、ND2、MTF3212/R3319等。
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