#科学回音壁 #线粒体 #免疫荧光 最近在小红书上看到有同学@猫老师，一看是关于线粒体外膜蛋白TOM20免疫荧光染色的问题，看了下小鱼同学@坠入深海里的鱼? 所用试剂抗体都没什么问题，而且小鱼同学的步骤看起来也没问题，所用的固定液也是猫老师推荐的很常用的做细胞线粒体蛋白染色的多聚甲醛固定液，染色的一个问题是线粒体模糊，只有模糊的形态，而同时做得另外一个抗体染色也存在同样的问题。
猫老师定睛一看，注意到小鱼同学固定的温度，小鱼同学固定用的37℃温度来固定，这个在很多CNS的文献上也是这么用的，但小鱼同学放在了培养箱中固定，这个相当于在二氧化碳的环境中，强行让细胞致死一样，对有一些细胞的蛋白染色来说是不友好的，所以猫老师建议可以预温多聚甲醛固定液，但是放在室温固定即可，于是小鱼同学优化了一下固定条件，然后不出意料，小鱼同学的TOM20染色就做出来啦，而且还可以看到丝丝分明的线粒体，小鱼同学说目前只是用的共聚焦拍摄，回头上HIS-SIM，我相信效果一定更加棒棒哒。
[派对R][派对R][派对R]猫老师征求了小鱼同学的同意，把这个发了一篇笔记，感谢小鱼同学供图，如果有其他同学遇到小鱼同学类似的问题，可以参考下小鱼同学。最后，希望大家做线粒体蛋白染色都顺顺利利哈。
#科研 #科研日常 #超分辨显微镜 #免疫荧光 #TOM20 #研究生学习
猫老师定睛一看，注意到小鱼同学固定的温度，小鱼同学固定用的37℃温度来固定，这个在很多CNS的文献上也是这么用的，但小鱼同学放在了培养箱中固定，这个相当于在二氧化碳的环境中，强行让细胞致死一样，对有一些细胞的蛋白染色来说是不友好的，所以猫老师建议可以预温多聚甲醛固定液，但是放在室温固定即可，于是小鱼同学优化了一下固定条件，然后不出意料，小鱼同学的TOM20染色就做出来啦，而且还可以看到丝丝分明的线粒体，小鱼同学说目前只是用的共聚焦拍摄，回头上HIS-SIM，我相信效果一定更加棒棒哒。
[派对R][派对R][派对R]猫老师征求了小鱼同学的同意，把这个发了一篇笔记，感谢小鱼同学供图，如果有其他同学遇到小鱼同学类似的问题，可以参考下小鱼同学。最后，希望大家做线粒体蛋白染色都顺顺利利哈。
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