悬浮细胞的FISH实验1将悬浮细胞固定在玻片上：方法一：用甩片机使固定在4%多聚甲醛的悬浮细胞贴在玻片（多聚赖氨酸处理过的，也就是PLL处理过的）上。方法二：涂片，将细胞悬液滴在多聚赖氨酸处理过的载玻片上，另取一个盖玻片做推片，将推片自细胞滴左侧向右移动，当细胞滴均匀地附着在两片之间时，再将推片向左平稳地移动（两片成30°-40°夹角）推出均匀的细胞涂片膜，在酒精灯外焰上过几次烘干（肉眼可见细胞变白）。2滴加100μL 0.1% Buffer A（现用现配），室温放置15min。3吸弃0.1% Buffer A，滴加PBS洗2次，每次5min。4吸弃PBS，滴加100μL 2×Buffer C，37℃培养箱放置30min。5Buffer E提前在37℃水浴锅孵育30min，至澄清透亮。6探针稀释：参照标签或者报告单上的参数：nmole/OD206，例如nmole/OD206=4.17，则在每OD探针干粉制品中加入41.7μL灭菌DEPC水，混匀后即可得到浓度为100μM的储存液，建议进行分装后避光储存于-20℃冰箱，避免反复冻融。7配制探针混合液：以100μL 探针混合液为例，即探针x μL（要先做预实验确定所需的探针浓度，可以设置不同的浓度梯度进行预实验，例如：0.5μM，1μM，2μM，4μM，8μM），加入Buffer E，总体系100μL，73℃变变性5min。8将玻片放入湿盒中，水平放置玻片，每张片滴加100μL变性后的探针混合液，盖上盖玻片（建议使用长盖玻片），用封片胶封片（建议使用购买的封片胶，不是中性树脂）。9至于原位杂交仪中，37℃孵育12-16h，注意一定要保持湿度以防止干片（干片实验就毁了），若无杂交仪可滴加100μL 变性后的探针混合液，直接在37℃培养箱中孵育12-16h。10杂交次日，将样本从37℃培养箱中取出，#科研实验 #细胞实验外包 #动物实验外包 #科研 #生物实验 #细胞实验 #动物实验 #实验 #医学实验 #细胞
