黄光和红光看着还行但是绿光信号很弱，我曝光时间拉到最大了，但是信噪比就有点不妙了，需要如何解决呢 换抗体吗
材料：悬浮细胞，Hdac8（fitc，兔源），p53（cy3，山羊来源），acp53（cy5，鼠源）
拍摄仪器：高内涵成像
方案步骤：
48小时前6孔板处理细胞
1.取出细胞，室温PBST洗2次，计数，选择相同数量的细胞接种至96孔板中，甩板机甩板
2.每孔白鲨4%多聚甲醛100ul固定，室温固定20min，甩板机甩板，弃去液体，室温晾干10min，后洗pbsT洗两遍
3.0.5%triton 室温破膜20min， 后PBST洗2次
4.加入雅酶无蛋白快速封闭液封闭半小时，pbst洗2遍
5.加入上述上个荧光一抗（1：50），每孔加50ul，4℃摇床过夜
5.回收一抗，PBST洗3次
6.加入荧光二抗山羊抗兔，山羊抗鼠，兔抗山羊（1:200），37℃避光孵育1.5小时
7.PBST洗3次（避光）
8.加入含抗荧光猝灭剂的DAPI，室温避光孵育10min
9.PBST洗3次（避光）
10.每孔加入100ul PBS，放入4℃冰箱避光保存
11.高内涵细胞成像拍照#细胞实验 #细胞 #蛋白泛素化 #免疫荧光#悬浮细胞 #科研 #生物医学科研
材料：悬浮细胞，Hdac8（fitc，兔源），p53（cy3，山羊来源），acp53（cy5，鼠源）
拍摄仪器：高内涵成像
方案步骤：
48小时前6孔板处理细胞
1.取出细胞，室温PBST洗2次，计数，选择相同数量的细胞接种至96孔板中，甩板机甩板
2.每孔白鲨4%多聚甲醛100ul固定，室温固定20min，甩板机甩板，弃去液体，室温晾干10min，后洗pbsT洗两遍
3.0.5%triton 室温破膜20min， 后PBST洗2次
4.加入雅酶无蛋白快速封闭液封闭半小时，pbst洗2遍
5.加入上述上个荧光一抗（1：50），每孔加50ul，4℃摇床过夜
5.回收一抗，PBST洗3次
6.加入荧光二抗山羊抗兔，山羊抗鼠，兔抗山羊（1:200），37℃避光孵育1.5小时
7.PBST洗3次（避光）
8.加入含抗荧光猝灭剂的DAPI，室温避光孵育10min
9.PBST洗3次（避光）
10.每孔加入100ul PBS，放入4℃冰箱避光保存
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