DAY 1：实验准备
1. 选取状态良好的细胞，更换为无血清培养基，饥饿处理24小时。
2. 将基质胶置于4℃过夜融化，移液管/枪头同步预冷。
DAY 2：包被基质胶与细胞接种
1. 用预冷吸头混匀基质胶，冰上操作。
2. 使用无血清培养基稀释至1 mg/mL，充分混匀。
3. 取60 µL胶液垂直加入Transwell小室，均匀铺平，避免气泡，37℃孵育1–3小时。
4. 吸除未结合胶液。
5. 加入100 µL无血清培养基，37℃水化30分钟。
6. 吸去液体，检查下室是否渗漏，确认无误后备用。
7. 用无血清培养基配制样本工作液（建议为终浓度的2倍），并设置空白对照。
8. 下室加入500 µL含10% FBS的完全培养基，置入Transwell小室。
9. 消化饥饿处理后的细胞，无血清培养基重悬，调整细胞密度。
10. 按样本:细胞悬液 = 1:1的比例加入小室（先加100 µL样本，再加100 µL细胞悬液），此时样本浓度为终浓度。
11. 37℃、5% CO₂、90%湿度培养24–48小时。
DAY 3：固定、染色与观察
1. 取出小室，弃培养液，用湿润棉签轻轻擦除室内未迁移细胞与残留基质胶。
2. 置于600 µL 4%多聚甲醛中固定30分钟。
3. 弃固定液，PBS清洗。
4. 放入600 µL结晶紫染液染色10分钟。
5. PBS清洗3次，风干。
6. 显微镜下观察并拍照，使用ImageJ统计3–5个视野细胞数，进行定量分析。
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1. 选取状态良好的细胞，更换为无血清培养基，饥饿处理24小时。
2. 将基质胶置于4℃过夜融化，移液管/枪头同步预冷。
DAY 2：包被基质胶与细胞接种
1. 用预冷吸头混匀基质胶，冰上操作。
2. 使用无血清培养基稀释至1 mg/mL，充分混匀。
3. 取60 µL胶液垂直加入Transwell小室，均匀铺平，避免气泡，37℃孵育1–3小时。
4. 吸除未结合胶液。
5. 加入100 µL无血清培养基，37℃水化30分钟。
6. 吸去液体，检查下室是否渗漏，确认无误后备用。
7. 用无血清培养基配制样本工作液（建议为终浓度的2倍），并设置空白对照。
8. 下室加入500 µL含10% FBS的完全培养基，置入Transwell小室。
9. 消化饥饿处理后的细胞，无血清培养基重悬，调整细胞密度。
10. 按样本:细胞悬液 = 1:1的比例加入小室（先加100 µL样本，再加100 µL细胞悬液），此时样本浓度为终浓度。
11. 37℃、5% CO₂、90%湿度培养24–48小时。
DAY 3：固定、染色与观察
1. 取出小室，弃培养液，用湿润棉签轻轻擦除室内未迁移细胞与残留基质胶。
2. 置于600 µL 4%多聚甲醛中固定30分钟。
3. 弃固定液，PBS清洗。
4. 放入600 µL结晶紫染液染色10分钟。
5. PBS清洗3次，风干。
6. 显微镜下观察并拍照，使用ImageJ统计3–5个视野细胞数，进行定量分析。
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