小伙伴们，国庆节前同事小P分享了ZO1免疫荧光图，很多小伙伴咨询的Protocol来啦！节后一直忙着，今天赶紧整理好了分享给大家，让大家久等啦~。大家以后想看什么内容，也欢迎随时4我或留言，我拿小本本记下来！
ZO-1（也称为TJP1）是一种关键的紧密连接（Tight Junctions）蛋白，位于上皮细胞和内皮细胞的紧密连接处，是紧密连接复合物的核心支架蛋白，负责维持组织完整性、极性及屏障功能。ZO-1的异常定位或表达与多种疾病相关，如肠道炎症、肿瘤转移及血脑屏障破坏等。
上次小P分享的图是人肾上皮细胞的ZO-1（红色）与α-Tubulin（绿色）共染色结果，结果显示ZO-1集中于细胞间连接处，信号清晰，呈现为细胞边缘的连续条带状分布，符合紧密连接的典型定位模式。那我们怎么才能做出这样的美图呢？
首先，细胞制样前，要将细胞状态调至zui 佳状态，制样密度在80%-90%之间，使细胞均匀分布在玻片上。
1. 样本固定
贴壁细胞（如MCF-7、HUVEC）：4%多聚甲醛(PFA)在1×PBS中室温固定15min。
2. 封闭
封闭可用动物血清，跟二抗种属来源一致，也可用3%BSA，降低非特异性背景。
3. 一抗孵育
抗体稀释：按照说明书推荐比例，可以做预实验摸索；
孵育条件：室温2h或4℃过夜（推荐4℃过夜以提高信号强度）。
4. 荧光二抗孵育
稀释比例：参考二抗说明书，孵育条件：室温避光1h。
5. 封片
封片时，盖玻片从一侧缓放载玻片上，避免气泡产生。
#膜蛋白 #免疫荧光 #ZO1 #科研日常 #硕博日常 #生命科学 #实验技巧 #和proteintech一起做IF实验 #proteintech #武汉三鹰
ZO-1（也称为TJP1）是一种关键的紧密连接（Tight Junctions）蛋白，位于上皮细胞和内皮细胞的紧密连接处，是紧密连接复合物的核心支架蛋白，负责维持组织完整性、极性及屏障功能。ZO-1的异常定位或表达与多种疾病相关，如肠道炎症、肿瘤转移及血脑屏障破坏等。
上次小P分享的图是人肾上皮细胞的ZO-1（红色）与α-Tubulin（绿色）共染色结果，结果显示ZO-1集中于细胞间连接处，信号清晰，呈现为细胞边缘的连续条带状分布，符合紧密连接的典型定位模式。那我们怎么才能做出这样的美图呢？
首先，细胞制样前，要将细胞状态调至zui 佳状态，制样密度在80%-90%之间，使细胞均匀分布在玻片上。
1. 样本固定
贴壁细胞（如MCF-7、HUVEC）：4%多聚甲醛(PFA)在1×PBS中室温固定15min。
2. 封闭
封闭可用动物血清，跟二抗种属来源一致，也可用3%BSA，降低非特异性背景。
3. 一抗孵育
抗体稀释：按照说明书推荐比例，可以做预实验摸索；
孵育条件：室温2h或4℃过夜（推荐4℃过夜以提高信号强度）。
4. 荧光二抗孵育
稀释比例：参考二抗说明书，孵育条件：室温避光1h。
5. 封片
封片时，盖玻片从一侧缓放载玻片上，避免气泡产生。
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