周三上午刚把报告归档，客户的电话就追了过来：“要对比 12 个健康人和患者的菌群，V3-V4 区得测准，还得找出关键差异菌，数据要能写论文。” 我赶紧提醒：“样本必须 - 80℃冻存，别反复冻融，不然菌群会坏。” 他爽快应下：“明天就送！”
次日客户攥着泡沫箱提手，掀开保温层时还呵着白气：“每管都标了组，冻存没断过冷。” 我捏着样本管摸了摸，外壁没水珠，放心收下。隔天用 Nanodrop 检测，屏幕跳出让人安心的数字 ——24 个样本浓度全超 10ng/μL，电泳图里 23kb 的条带亮得清晰，立刻发消息：“合格！能开工了。”
接下来的日子围着实验转：PCR 仪嗡鸣着跑 30 个循环，专门扩 V3-V4 区；磁珠纯化后建文库，Agilent 2100 检测时，插入片段 350-500bp、Q20 超 93%，刚好能上 MiSeq。测序时盯着屏幕，Q30 始终稳在 85% 以上，悬着的心才放下。
数据分析阶段更要细：先用软件切接头、拼 reads，再剔除嵌合体，按 97% 相似性聚成 OTU—— 每个 OTU 就是一个 “准物种”。注释时发现，拟杆菌门和厚壁菌门占了大多数，健康组里双歧杆菌属特别多。算多样性时，PCoA 图上两组样本分得清清楚楚，LEfSe 分析一跑，健康组双歧杆菌属的 LDA 值飙到 4.1，患者组则是拟杆菌属某类菌占优。
周五线上汇报，我点开图表：“您看 PCoA 图，健康和患者组完全分开；LEfSe 找出来，健康组双歧杆菌是关键优势菌。” 客户指着屏幕追问：“为啥 16S 这么准？” 我举了个例子：“它像微生物的身份证，保守区能把所有菌扩出来，可变区又能分清谁是谁。”
他一下子兴奋了：“这数据刚好撑论文核心！下次想分析菌的代谢功能，还找你们。” 我笑着应：“用 PICRUSt 就行，提前对接需求就好。” 挂了电话，很快收到他的消息：“合作太顺了，已推给同事。” 看着这句话，感觉这阵子的忙碌都值了 —— 不仅交了差，还攒下了信任。
#生信分析 #生物信息学 #医学博士 #数据分析 #医学SCI #肠道菌群 #生物医学科研 #sci#医学研究生 #医学实验
次日客户攥着泡沫箱提手，掀开保温层时还呵着白气：“每管都标了组，冻存没断过冷。” 我捏着样本管摸了摸，外壁没水珠，放心收下。隔天用 Nanodrop 检测，屏幕跳出让人安心的数字 ——24 个样本浓度全超 10ng/μL，电泳图里 23kb 的条带亮得清晰，立刻发消息：“合格！能开工了。”
接下来的日子围着实验转：PCR 仪嗡鸣着跑 30 个循环，专门扩 V3-V4 区；磁珠纯化后建文库，Agilent 2100 检测时，插入片段 350-500bp、Q20 超 93%，刚好能上 MiSeq。测序时盯着屏幕，Q30 始终稳在 85% 以上，悬着的心才放下。
数据分析阶段更要细：先用软件切接头、拼 reads，再剔除嵌合体，按 97% 相似性聚成 OTU—— 每个 OTU 就是一个 “准物种”。注释时发现，拟杆菌门和厚壁菌门占了大多数，健康组里双歧杆菌属特别多。算多样性时，PCoA 图上两组样本分得清清楚楚，LEfSe 分析一跑，健康组双歧杆菌属的 LDA 值飙到 4.1，患者组则是拟杆菌属某类菌占优。
周五线上汇报，我点开图表：“您看 PCoA 图，健康和患者组完全分开；LEfSe 找出来，健康组双歧杆菌是关键优势菌。” 客户指着屏幕追问：“为啥 16S 这么准？” 我举了个例子：“它像微生物的身份证，保守区能把所有菌扩出来，可变区又能分清谁是谁。”
他一下子兴奋了：“这数据刚好撑论文核心！下次想分析菌的代谢功能，还找你们。” 我笑着应：“用 PICRUSt 就行，提前对接需求就好。” 挂了电话，很快收到他的消息：“合作太顺了，已推给同事。” 看着这句话，感觉这阵子的忙碌都值了 —— 不仅交了差，还攒下了信任。
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