? 免疫荧光：给蛋白“上色”
? 说人话：用一抗找到目标蛋白，再用带荧光标签的二抗去结合一抗，最后用激光一照，目标蛋白就在显微镜下发光了！
? 专业三步走：
固定与透化：把细胞“定格”在某一刻，并把细胞膜“打出小孔”，让抗体能进去。
抗体结合：
一抗：特异性识别你的目标蛋白。
二抗：带荧光基团，识别一抗的Fc段，实现信号放大和可视化。
成像：用特定波长的激光激发荧光基团，收集发射光，形成彩色图像。
? 实验步骤：
? 实验前准备：
细胞：爬片或共聚焦培养皿中的细胞。
抗体： validated for IF/IHC的一抗，以及对应的荧光二抗。
关键试剂：多聚甲醛、Triton X-100、DAPI、抗荧光淬灭封片剂。
Step 1： 细胞固定· “时空冻结”
目的：保持细胞结构和蛋白位置的原始状态。
方法：弃培养基，用预冷的4%多聚甲醛 在室温覆盖细胞15-20分钟。
? 小贴士：时间过长会导致蛋白交联过度，影响抗体结合。
Step 2： 透化· “开门迎客”
目的：在细胞膜上打孔，让抗体进入细胞。
方法：用0.5% Triton X-100 室温透化10-15分钟。
? 小贴士：对于膜蛋白，可用温和的去垢剂如Saponin。
Step 3： 封闭 · “清场降噪”
目的：用无关蛋白封闭非特异性结合位点，降低背景。
方法：用5% BSA 或山羊血清 在室温封闭1小时。
Step 4： 一抗孵育· “精准定位”
方法：滴加用封闭液稀释的一抗，4°C湿盒中过夜。
? 小贴士：这是成功的关键！确保抗体浓度和孵育时间最优。
Step 5： 二抗孵育 · “点亮信号”
方法：避光条件下，滴加带荧光基团的二抗，室温孵育1-2小时。
? 小贴士：从此步骤开始，全程避光！防止荧光淬灭。
Step 6： 染核 & 封片 · “勾勒轮廓”
染核：用DAPI 染色10-30分钟，将细胞核染成蓝色，提供细胞定位背景。
封片：用抗荧光淬灭封片剂封片，用指甲油密封盖玻片边缘。
? 小贴士：封片剂中可加入防淬灭剂，延长荧光寿命。
常见问题和解决方案在P6，图片处理后续再更新啦～
#科研 #实验 #研究生 #医学博士 #免疫荧光
? 说人话：用一抗找到目标蛋白，再用带荧光标签的二抗去结合一抗，最后用激光一照，目标蛋白就在显微镜下发光了！
? 专业三步走：
固定与透化：把细胞“定格”在某一刻，并把细胞膜“打出小孔”，让抗体能进去。
抗体结合：
一抗：特异性识别你的目标蛋白。
二抗：带荧光基团，识别一抗的Fc段，实现信号放大和可视化。
成像：用特定波长的激光激发荧光基团，收集发射光，形成彩色图像。
? 实验步骤：
? 实验前准备：
细胞：爬片或共聚焦培养皿中的细胞。
抗体： validated for IF/IHC的一抗，以及对应的荧光二抗。
关键试剂：多聚甲醛、Triton X-100、DAPI、抗荧光淬灭封片剂。
Step 1： 细胞固定· “时空冻结”
目的：保持细胞结构和蛋白位置的原始状态。
方法：弃培养基，用预冷的4%多聚甲醛 在室温覆盖细胞15-20分钟。
? 小贴士：时间过长会导致蛋白交联过度，影响抗体结合。
Step 2： 透化· “开门迎客”
目的：在细胞膜上打孔，让抗体进入细胞。
方法：用0.5% Triton X-100 室温透化10-15分钟。
? 小贴士：对于膜蛋白，可用温和的去垢剂如Saponin。
Step 3： 封闭 · “清场降噪”
目的：用无关蛋白封闭非特异性结合位点，降低背景。
方法：用5% BSA 或山羊血清 在室温封闭1小时。
Step 4： 一抗孵育· “精准定位”
方法：滴加用封闭液稀释的一抗，4°C湿盒中过夜。
? 小贴士：这是成功的关键！确保抗体浓度和孵育时间最优。
Step 5： 二抗孵育 · “点亮信号”
方法：避光条件下，滴加带荧光基团的二抗，室温孵育1-2小时。
? 小贴士：从此步骤开始，全程避光！防止荧光淬灭。
Step 6： 染核 & 封片 · “勾勒轮廓”
染核：用DAPI 染色10-30分钟，将细胞核染成蓝色，提供细胞定位背景。
封片：用抗荧光淬灭封片剂封片，用指甲油密封盖玻片边缘。
? 小贴士：封片剂中可加入防淬灭剂，延长荧光寿命。
常见问题和解决方案在P6，图片处理后续再更新啦～
#科研 #实验 #研究生 #医学博士 #免疫荧光
