外泌体体外细胞示踪实验步骤 ?
一、外泌体提取与标记 ✨
1. 提取纯化：收集无外泌体血清培养的细胞上清。? 300×g、2000×g、10000×g离心去除细胞及碎片。超速离心(100,000×g, 70-90分钟)获得外泌体沉淀，PBS重悬。?
2. 荧光标记：用稀释液配制PKH67/DiI染料(1×10⁻⁶ M)。? 取50-100μg外泌体与等体积染料避光孵育15-20分钟。加入1% BSA终止反应。
二、标记后纯化 ?
采用超滤离心法(10-100kDa超滤管)：加入PBS至满体积，14,000×g离心15分钟，重复洗涤3次。? 最终用PBS重悬标记外泌体，冰上避光保存。
三、细胞共培养 ?
将受体细胞铺于共聚焦培养皿(60%-80%密度)。? 实验组加入标记外泌体，设阴性对照(未标记外泌体)和染料背景对照。37℃避光孵育4-24小时。⏰
四、观察成像 ?
1. PBS清洗3次去除表面外泌体
2. 4%多聚甲醛固定，DAPI染核 ?
3. 共聚焦显微镜观察：
PKH67: 490/502 nm(绿色) ?
DiI: 549/565 nm(红色) ❤️
细胞质内见荧光斑点示摄取成功！?
注意事项：优化染料浓度与孵育时间；全程避光；? 设严格对照；可加抑制剂验证摄取机制。#外泌体 #外泌体提取 #外泌体鉴定 #外泌体研究 #外泌体修复 #外泌体分离 #外泌体科研 #细胞外泌体 #外泌体研究专家 #牛奶外泌体
一、外泌体提取与标记 ✨
1. 提取纯化：收集无外泌体血清培养的细胞上清。? 300×g、2000×g、10000×g离心去除细胞及碎片。超速离心(100,000×g, 70-90分钟)获得外泌体沉淀，PBS重悬。?
2. 荧光标记：用稀释液配制PKH67/DiI染料(1×10⁻⁶ M)。? 取50-100μg外泌体与等体积染料避光孵育15-20分钟。加入1% BSA终止反应。
二、标记后纯化 ?
采用超滤离心法(10-100kDa超滤管)：加入PBS至满体积，14,000×g离心15分钟，重复洗涤3次。? 最终用PBS重悬标记外泌体，冰上避光保存。
三、细胞共培养 ?
将受体细胞铺于共聚焦培养皿(60%-80%密度)。? 实验组加入标记外泌体，设阴性对照(未标记外泌体)和染料背景对照。37℃避光孵育4-24小时。⏰
四、观察成像 ?
1. PBS清洗3次去除表面外泌体
2. 4%多聚甲醛固定，DAPI染核 ?
3. 共聚焦显微镜观察：
PKH67: 490/502 nm(绿色) ?
DiI: 549/565 nm(红色) ❤️
细胞质内见荧光斑点示摄取成功！?
注意事项：优化染料浓度与孵育时间；全程避光；? 设严格对照；可加抑制剂验证摄取机制。#外泌体 #外泌体提取 #外泌体鉴定 #外泌体研究 #外泌体修复 #外泌体分离 #外泌体科研 #细胞外泌体 #外泌体研究专家 #牛奶外泌体
