仪器仪表
高效液相色谱法入门
2025-11-06 10:04
高效液相色谱法入门

高效液相色谱法入门

图示仪器型号:Agilent 1260
仪器模块:放置流动相区域、泵、进样器、柱温箱、检测器、数据分析系统(计算机系统)
分模块注意事项⚠️⚠️⚠️

流动相:对流动相进行超声脱气和排气处理(排气时记得拧开排气阀);
含盐量高的流动相使用前后都需要用热水维护仪器管路

泵:1️⃣关注是否漏液-2种判定①漏液传感器报警②在线谱图压力低-2个可能原因①连接处松动②泵的密封垫需要更换了
2️⃣有时怀疑谱图出现的鬼峰由流动相系统带来而暂时没有更好的流动相纯化技术时,考虑在进样器模块前连接1根鬼峰捕集小柱
3️⃣尽管仪器对流动相有在线混合功能,在进行梯度洗脱时仍不建议两纯相分别置于两泵(例如,梯度由40%甲醇60%乙腈➡️➡️60%甲醇40%乙腈时,建议分别配好流动相,而不是直接将A泵置于纯甲醇、B泵置于纯乙腈

进样器:夏天温度高时,如果待测样品的溶剂含有机相比例高,注意溶剂挥发影响实验结果的问题

柱温箱:1️⃣色谱柱连接方向:柱身箭头所指方向为从进样器➡️检测器的方向
2️⃣因为有两端接口,这里也是漏液大户,不过漏液了仪器会报错,重新拧端口就行
3️⃣很多情况下,整个系统的压力过大是因为色谱柱堵了。这包括①柱筛板堵了——反冲色谱柱一定程度上有效②色谱柱内部甚至整个仪器中有盐析出——这要求我们养成良好的实验习惯:洗脱剂从高盐相调节到高有机相比例时注意过渡
4️⃣C18色谱柱使用过程中不能接触纯水相,否则内部填料塌陷

检测器:有时故障发生在氘灯,或点火失败,或氘灯能量不足。需记录更换周期,提前预防。

除了过滤头、密封圈、氘灯,高效液相还有许多小部件,建立高效液相色谱的维修与维护台账,定期更换小部件,能使实验更加得心应手!

好习惯分享

在系统进行平衡时,通过追踪流通系统的液流判断系统是否存在不正常的情况。从放置流动相的平台开始(充足的在效期内的流动相),追踪连接泵的转移管线(无气泡,无泄漏),然后自动进样器(足够的洗泵液),然后柱温箱(无泄漏,连接方向正确)、检测器(无泄漏)、废液桶(足够的容量)以及在线谱图压力稳定正常。
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