外泌体染色
1.将50ml细胞上清 10000g，4℃离心10min去除细胞沉淀，保留上清；
2.0.22μm滤器过滤；
3.将上清转移至15ml超滤管浓缩，3500rpm，4℃离心30min，将50ml细胞上清浓缩至25ml以内；
4.将浓缩的细胞上清 120000g离心90min，50µl PBS重悬沉淀得到外泌体；
5.配置PKH26染色工作液：将“PKH26 linker”和“Diluent C”按1：9比例混匀（常温避光操作）；
6.外泌体染色：向外泌体中加入PKH26染色工作液，充分混匀后静置孵育10min（常温避光操作）；
7.120000g离心90min除去游离的工作液；
外泌体摄取：
1.细胞准备：将细胞以2~5×104个/孔的密度接种24孔板，培养24h；
2.细胞吞噬外泌体：测定标记后的外泌体的蛋白浓度，以每孔50 μg/mL 的蛋白终浓度加入培养孔（200μl/孔），继续培养24 h（细胞吞噬过程）。
细胞骨架标记：
1.弃上清，PBS洗细胞3次；
2. 4%多聚甲醛固定15min；
3. 4%多聚甲醛固，PBS洗细胞3次；
4.用 0.2% Triton X-100 孵育样品 10 min破膜；
5.用 PBS避光 洗涤细胞 3 次；
6.鬼笔环肽孵育：2滴/mlPBS稀释，37℃孵育30min；
7.弃鬼笔环肽工作液，用 PBS 避光洗涤细胞 3 - 5 次；
8.用Hoechst 33342染细胞核，指甲油封片；
9.激光共聚焦显微镜拍照。#细胞实验
1.将50ml细胞上清 10000g，4℃离心10min去除细胞沉淀，保留上清；
2.0.22μm滤器过滤；
3.将上清转移至15ml超滤管浓缩，3500rpm，4℃离心30min，将50ml细胞上清浓缩至25ml以内；
4.将浓缩的细胞上清 120000g离心90min，50µl PBS重悬沉淀得到外泌体；
5.配置PKH26染色工作液：将“PKH26 linker”和“Diluent C”按1：9比例混匀（常温避光操作）；
6.外泌体染色：向外泌体中加入PKH26染色工作液，充分混匀后静置孵育10min（常温避光操作）；
7.120000g离心90min除去游离的工作液；
外泌体摄取：
1.细胞准备：将细胞以2~5×104个/孔的密度接种24孔板，培养24h；
2.细胞吞噬外泌体：测定标记后的外泌体的蛋白浓度，以每孔50 μg/mL 的蛋白终浓度加入培养孔（200μl/孔），继续培养24 h（细胞吞噬过程）。
细胞骨架标记：
1.弃上清，PBS洗细胞3次；
2. 4%多聚甲醛固定15min；
3. 4%多聚甲醛固，PBS洗细胞3次；
4.用 0.2% Triton X-100 孵育样品 10 min破膜；
5.用 PBS避光 洗涤细胞 3 次；
6.鬼笔环肽孵育：2滴/mlPBS稀释，37℃孵育30min；
7.弃鬼笔环肽工作液，用 PBS 避光洗涤细胞 3 - 5 次；
8.用Hoechst 33342染细胞核，指甲油封片；
9.激光共聚焦显微镜拍照。#细胞实验