?❄️在免疫荧光实验中，固定和透化是确保成功的关键步骤。固定的目的是保持细胞或组织的结构，防止降解；透化则是使抗体能够进入细胞内部，与目标抗原结合。选择合适的固定剂和透化剂对于获得准确的实验结果至关重要。这里要记住的是，没有最优的固定剂和通透剂，只有最适配你使用抗体的固定剂和通透剂！
好多uu可能刚接触免疫荧光的时候对于试剂的选择很迷茫，这里为大家解析下不同试剂的特点，以及给大家分析一下免疫荧光如果没有信号或者背景太强时可能的原因及解决办法
?常用固定剂及其原理：
甲醛（如4%多聚甲醛）：甲醛是一种交联固定剂，通过与细胞内的蛋白质和其他生物大分子形成共价键，交联并稳定细胞结构。这种方法能够很好地保存细胞形态，并保持可溶性蛋白的定位。然而，某些抗原可能在此过程中失去抗原性，影响后续抗体的结合。
甲醇：甲醇是一种脱水/变性固定剂，通过替换细胞内的水分子，导致蛋白质变性和沉淀。这种方法可能暴露平时隐藏的抗原表位，对某些抗体有利。但对于可溶性靶标和特定修饰状态的抗体（如磷酸化抗体），可能不太适用。
?常用透化剂及其原理：
去垢剂（如Triton X-100）：去垢剂通过溶解细胞膜的脂质成分，形成孔洞，使抗体能够进入细胞内部。不同的去垢剂（如NP-40、TWEEN等）对细胞膜的作用程度不同，需根据实验需求选择。
醇类（如甲醇）：醇类透化结合了交联固定和变性作用，能够增强某些靶标的信号，特别是与细胞器或细胞骨架相关的靶标。但需注意，对某些抗体可能不适用。
这里选用了CST官方的资料，给大家展示不同的固定与通透方法，可以带来截然不同的拍摄效果
?大家看P3可以发现横向比较使用不同固定实验步骤固定的 HeLa 细胞，表明 Keratin 8/18 (C51) Mouse mAb #4546 配合甲醇固定法效果最好。相反，AIF (D39D2) XP® Rabbit mAb #5318 配合甲醛固定法效果最好。
?对于P4，左图使用的是0.3% Triton X-100通透，而右图使用甲醇通透，我们能看到，对于PDI (C81H6) Rabbit mAb #3501 和 β-Actin (8H10D10) Mouse mAb #3700这个抗体，配合甲醇透化法效果最好。
最后两张图，就是大家如果在免疫荧光拍照时，拍摄效果不理想的话，可以对比排查一下是什么地方出了问题
祝大家都能拍出完美的免疫荧光图#免疫荧光
好多uu可能刚接触免疫荧光的时候对于试剂的选择很迷茫，这里为大家解析下不同试剂的特点，以及给大家分析一下免疫荧光如果没有信号或者背景太强时可能的原因及解决办法
?常用固定剂及其原理：
甲醛（如4%多聚甲醛）：甲醛是一种交联固定剂，通过与细胞内的蛋白质和其他生物大分子形成共价键，交联并稳定细胞结构。这种方法能够很好地保存细胞形态，并保持可溶性蛋白的定位。然而，某些抗原可能在此过程中失去抗原性，影响后续抗体的结合。
甲醇：甲醇是一种脱水/变性固定剂，通过替换细胞内的水分子，导致蛋白质变性和沉淀。这种方法可能暴露平时隐藏的抗原表位，对某些抗体有利。但对于可溶性靶标和特定修饰状态的抗体（如磷酸化抗体），可能不太适用。
?常用透化剂及其原理：
去垢剂（如Triton X-100）：去垢剂通过溶解细胞膜的脂质成分，形成孔洞，使抗体能够进入细胞内部。不同的去垢剂（如NP-40、TWEEN等）对细胞膜的作用程度不同，需根据实验需求选择。
醇类（如甲醇）：醇类透化结合了交联固定和变性作用，能够增强某些靶标的信号，特别是与细胞器或细胞骨架相关的靶标。但需注意，对某些抗体可能不适用。
这里选用了CST官方的资料，给大家展示不同的固定与通透方法，可以带来截然不同的拍摄效果
?大家看P3可以发现横向比较使用不同固定实验步骤固定的 HeLa 细胞，表明 Keratin 8/18 (C51) Mouse mAb #4546 配合甲醇固定法效果最好。相反，AIF (D39D2) XP® Rabbit mAb #5318 配合甲醛固定法效果最好。
?对于P4，左图使用的是0.3% Triton X-100通透，而右图使用甲醇通透，我们能看到，对于PDI (C81H6) Rabbit mAb #3501 和 β-Actin (8H10D10) Mouse mAb #3700这个抗体，配合甲醇透化法效果最好。
最后两张图，就是大家如果在免疫荧光拍照时，拍摄效果不理想的话，可以对比排查一下是什么地方出了问题
祝大家都能拍出完美的免疫荧光图#免疫荧光