脑子固有用，但精神失常是常态
注意事项多把嘴：
灌流时灌流针要从心尖入针，与室间隔平行进针（但不能太深，难以进针的原因一般只有一个，那就是弯镊托举心脏不稳定，要多找手感！）；如果不稳定，那就增长时间，如从5min到10min；
打了病毒需要看更超微结构的研究组，灌流时的4%多聚甲醛固定不能少（之前试过只灌流了0.9%生理盐水或1xPBS，从10um-20um-30um……100um-200um-250um，神经元树突棘都很难出形态，要么是只能看到胞体，看不见轴突，要么是看的见轴突但看不见树突棘。多甲醛固定这一步会获得更好的Image呈现，可能是我菜的原因当然个人感觉还是外加染色更好；
有时候冰切染不出来的可以试试震荡切，相反亦然；
切全脑会比较费劲儿，注意左右对称调整冻头，只要一开始是平的，一般都不会有什么大问题；
OCT冻存的时候，脑子一定要放平稳，防止冻歪；冻歪的脑子可以重新解冻重新速冻，对于一般的分子染色不会有太大的影响，但难染的分子难以保证，可适当抗原修复一下；
防卷板和刀片要提前放入冰切机种遇冷，而后调节防卷板至与刀片平齐即可防卷（有时候由于机子陈旧，防卷效果会有不佳，可以试着“手动防卷”——轻抬防卷板，防卷板与刀片有一些些、一点点缝隙留给脑片通过，以达到防卷作用。
祝大家明天、后天、将来，都是快乐的科研人
#研究牲 #科研 #神经科学研究 #冰冻切片 #鼠脑切片 #震荡切片 #免疫荧光 #灌流取脑
注意事项多把嘴：
灌流时灌流针要从心尖入针，与室间隔平行进针（但不能太深，难以进针的原因一般只有一个，那就是弯镊托举心脏不稳定，要多找手感！）；如果不稳定，那就增长时间，如从5min到10min；
打了病毒需要看更超微结构的研究组，灌流时的4%多聚甲醛固定不能少（之前试过只灌流了0.9%生理盐水或1xPBS，从10um-20um-30um……100um-200um-250um，神经元树突棘都很难出形态，要么是只能看到胞体，看不见轴突，要么是看的见轴突但看不见树突棘。多甲醛固定这一步会获得更好的Image呈现，可能是我菜的原因当然个人感觉还是外加染色更好；
有时候冰切染不出来的可以试试震荡切，相反亦然；
切全脑会比较费劲儿，注意左右对称调整冻头，只要一开始是平的，一般都不会有什么大问题；
OCT冻存的时候，脑子一定要放平稳，防止冻歪；冻歪的脑子可以重新解冻重新速冻，对于一般的分子染色不会有太大的影响，但难染的分子难以保证，可适当抗原修复一下；
防卷板和刀片要提前放入冰切机种遇冷，而后调节防卷板至与刀片平齐即可防卷（有时候由于机子陈旧，防卷效果会有不佳，可以试着“手动防卷”——轻抬防卷板，防卷板与刀片有一些些、一点点缝隙留给脑片通过，以达到防卷作用。
祝大家明天、后天、将来，都是快乐的科研人
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