溯源于此阶段（全程yamei需自己配置的预制胶配胶法、传统电泳及湿转……有点多，写不完分两期）小分子篇：
膜：NC膜（我一般定义40kd以上为大分子，用0.22um）
5%脱脂奶粉室温封闭1h；一抗直接四度过夜
洗涤：tbst洗3次，10min/次
BAX(15-25kd)\\Bcl-2(20-30kd)：
浓缩胶5%电泳60v，分离胶“12.5%”电泳120v，溴酚蓝跑到底；
电转250mA，“50min”；
IBA1（15-20kd）：
浓缩胶5%电泳60v，分离胶“12.5%”电泳120v，溴酚蓝跑到底；
电转250mA，“50min”；
alpha-syn（14kd）\\phospho-alpha-syn（14kd）：
浓缩胶5%电泳60v，分离胶“12.5%”电泳120v，溴酚蓝跑到底；
电转250mA，“50min”；
⚠️封闭前操作：
4%多聚甲醛（PFA）室温固定30min，然后tbst洗一洗就可以封闭了。
IL-6（20-24kd）
浓缩胶5%电泳60v，分离胶“12.5%”电泳120v，溴酚蓝跑到底；
电转250mA，“50min”；
⚠️封闭前操作（可做可不做，但我发现，固定对小分子非常友好！）：
4%多聚甲醛（PFA）室温固定30min，然后tbst洗一洗就可以封闭了。
#科研狗 #研究牲 #科研 #生物实验 #wb
膜：NC膜（我一般定义40kd以上为大分子，用0.22um）
5%脱脂奶粉室温封闭1h；一抗直接四度过夜
洗涤：tbst洗3次，10min/次
BAX(15-25kd)\\Bcl-2(20-30kd)：
浓缩胶5%电泳60v，分离胶“12.5%”电泳120v，溴酚蓝跑到底；
电转250mA，“50min”；
IBA1（15-20kd）：
浓缩胶5%电泳60v，分离胶“12.5%”电泳120v，溴酚蓝跑到底；
电转250mA，“50min”；
alpha-syn（14kd）\\phospho-alpha-syn（14kd）：
浓缩胶5%电泳60v，分离胶“12.5%”电泳120v，溴酚蓝跑到底；
电转250mA，“50min”；
⚠️封闭前操作：
4%多聚甲醛（PFA）室温固定30min，然后tbst洗一洗就可以封闭了。
IL-6（20-24kd）
浓缩胶5%电泳60v，分离胶“12.5%”电泳120v，溴酚蓝跑到底；
电转250mA，“50min”；
⚠️封闭前操作（可做可不做，但我发现，固定对小分子非常友好！）：
4%多聚甲醛（PFA）室温固定30min，然后tbst洗一洗就可以封闭了。
#科研狗 #研究牲 #科研 #生物实验 #wb