1. 我做的是293T细胞的爬片，爬片放在六孔板里，细胞前一天种植密度百分之40，第二天开始做的时候密度达到百分之70-80即可。293T太密度话细胞展不开，影响观察。可以直接购买有赖氨酸涂层的无菌爬片，省去自己灭菌的步骤
2. 固定剂选择很重要。一开始我用甲醇固定，看不到想要的细胞器结构，甲醇会一定程度影响细胞结构。我用的是4%多聚甲醛
3. 固定细胞的时候要求室温，但是有的实验室所在地区、季节比较冷。可以先把多聚甲醛在37度水浴，再加到细胞孔板或培养皿，室温固定的时候把细胞继续放在37度培养箱。固定之后细胞就全死了，后续就可以略“粗暴”的操作了。有人说移液器吹打到细胞，细胞容易飘。如果固定以后飘，可能是细胞太密了，形成一层膜，就容易飘起来
4. 抗体不要用放太久的
5. BSA封闭时间要够
6. 二抗清洗次数和时间要够，不然背景可能比较噪
7. 我是用了好多莱卡 蔡司 奥林巴斯在学校放的样机，会有工程师来协助，学校仪器平台的老师也很擅长调参数。拍摄的时候掌握合适的参数调节方式很重要。有时候片子其实做的没问题，是参数设置不合理。
8. 我会用用防荧光淬灭的封片剂，注意后续避光保存
#实验 #科研日常 #中山大学 #免疫荧光 #细胞培养 #抗体
2. 固定剂选择很重要。一开始我用甲醇固定，看不到想要的细胞器结构，甲醇会一定程度影响细胞结构。我用的是4%多聚甲醛
3. 固定细胞的时候要求室温，但是有的实验室所在地区、季节比较冷。可以先把多聚甲醛在37度水浴，再加到细胞孔板或培养皿，室温固定的时候把细胞继续放在37度培养箱。固定之后细胞就全死了，后续就可以略“粗暴”的操作了。有人说移液器吹打到细胞，细胞容易飘。如果固定以后飘，可能是细胞太密了，形成一层膜，就容易飘起来
4. 抗体不要用放太久的
5. BSA封闭时间要够
6. 二抗清洗次数和时间要够，不然背景可能比较噪
7. 我是用了好多莱卡 蔡司 奥林巴斯在学校放的样机，会有工程师来协助，学校仪器平台的老师也很擅长调参数。拍摄的时候掌握合适的参数调节方式很重要。有时候片子其实做的没问题，是参数设置不合理。
8. 我会用用防荧光淬灭的封片剂，注意后续避光保存
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