
生物膜培养
1. 从-80冰箱取保藏的菌株,在LB固体平板上划线复苏并纯化;
2. 挑取单克隆,1:1000接种至2mlLB液体培养基中
3. 按1:100接种至LB中,每孔200μl液体,在 37°C 培养箱静置培养72h。
生物膜处理染色
1. 培养完成后取出96孔板,弃去培养基并用PBS洗涤1次。
2. 每孔加入200μl 4%多聚甲醛/甲醇室温固定15min
3. 除去多聚甲醛,每孔小心加入300μl PBS洗去残留的固定液,弃去
4. 每孔加入200μl 0.1%结晶紫溶液,室温静置染色30min;
5. 弃去结晶紫,用PBS洗涤3次;
6. 晾干后,加入200μl 75%乙醇,轻轻震荡平板,室温溶解3-5min,使生物膜颜色完全溶解。
7. 用酶标仪在 570 nm 处检测吸光度。
#生物膜 #细菌实验 #实验方法 #科研
1. 从-80冰箱取保藏的菌株,在LB固体平板上划线复苏并纯化;
2. 挑取单克隆,1:1000接种至2mlLB液体培养基中
3. 按1:100接种至LB中,每孔200μl液体,在 37°C 培养箱静置培养72h。
生物膜处理染色
1. 培养完成后取出96孔板,弃去培养基并用PBS洗涤1次。
2. 每孔加入200μl 4%多聚甲醛/甲醇室温固定15min
3. 除去多聚甲醛,每孔小心加入300μl PBS洗去残留的固定液,弃去
4. 每孔加入200μl 0.1%结晶紫溶液,室温静置染色30min;
5. 弃去结晶紫,用PBS洗涤3次;
6. 晾干后,加入200μl 75%乙醇,轻轻震荡平板,室温溶解3-5min,使生物膜颜色完全溶解。
7. 用酶标仪在 570 nm 处检测吸光度。
#生物膜 #细菌实验 #实验方法 #科研