?什么是原位杂交？
原位杂交（In Situ Hybridization）是一种在**组织或细胞原位检测特定核酸序列**的技术！简单说，就是用标记的DNA/RNA探针，精准定位目标基因的位置，像“分子GPS”一样直观显示基因表达。
适用场景：
✅基因表达定位
✅病毒检测
✅肿瘤标志物分析
✅发育生物学研究
?实验亮点速览
1️⃣ 步骤优化：从探针设计到显色封片，全流程拆解！
2️⃣ 防污染秘籍：DEPC处理+高温烘烤，RNA酶无处藏身！
3️⃣ 探针黑科技：正义/反义探针对照，实验结果更可靠！
4️⃣ 信号增强技巧：甲酰胺+硫酸葡聚糖，杂交效率UP↑！
?实验步骤
1️⃣ 样本处理
-固定：新鲜组织30分钟内用4%多聚甲醛固定，保持RNA完整性。
-切片：冰冻切片厚度15-20μm，贴于专用玻片，蔗糖梯度脱水防冰晶。
2️⃣ 探针制备
- 设计引物：长度500bp最佳，T7/SP6启动子加持。
- 体外转录：正义探针作阴性对照，反义探针显目标信号！
- 纯化保存：乙醇沉降+70%乙醇洗涤，-80℃长期备用。
3️⃣ 杂交反应
- 预处理：蛋白酶K消化暴露靶点，乙酸酐阻断非特异结合。
- 预杂交：42℃孵育阻断背景，探针浓度0.5-5ng/μl最佳。
- 杂交过夜：探针变性后与靶核酸结合，盖玻片防蒸发！
4️⃣ 信号检测
- 洗脱：梯度SSC洗涤去除非特异探针。
- 抗体孵育：抗地高辛抗体-碱性磷酸酶复合物，4℃过夜结合。
- 显色封片：NBT/BCIP显蓝紫色信号，中性红复染+树胶封片。
⚠️注意事项
- 防RNase污染：全程戴手套，玻璃器皿180℃烘烤4小时。
- 探针长度：50-300碱基最佳，过长穿透力差。
- 杂交液配方：甲酰胺降低变性温度，硫酸葡聚糖浓缩探针。
下期神经细胞标志物干货满满敬请期待！
#医学实验 #分子生物学 #浩克生物 #原位杂交 #病理切片
原位杂交（In Situ Hybridization）是一种在**组织或细胞原位检测特定核酸序列**的技术！简单说，就是用标记的DNA/RNA探针，精准定位目标基因的位置，像“分子GPS”一样直观显示基因表达。
适用场景：
✅基因表达定位
✅病毒检测
✅肿瘤标志物分析
✅发育生物学研究
?实验亮点速览
1️⃣ 步骤优化：从探针设计到显色封片，全流程拆解！
2️⃣ 防污染秘籍：DEPC处理+高温烘烤，RNA酶无处藏身！
3️⃣ 探针黑科技：正义/反义探针对照，实验结果更可靠！
4️⃣ 信号增强技巧：甲酰胺+硫酸葡聚糖，杂交效率UP↑！
?实验步骤
1️⃣ 样本处理
-固定：新鲜组织30分钟内用4%多聚甲醛固定，保持RNA完整性。
-切片：冰冻切片厚度15-20μm，贴于专用玻片，蔗糖梯度脱水防冰晶。
2️⃣ 探针制备
- 设计引物：长度500bp最佳，T7/SP6启动子加持。
- 体外转录：正义探针作阴性对照，反义探针显目标信号！
- 纯化保存：乙醇沉降+70%乙醇洗涤，-80℃长期备用。
3️⃣ 杂交反应
- 预处理：蛋白酶K消化暴露靶点，乙酸酐阻断非特异结合。
- 预杂交：42℃孵育阻断背景，探针浓度0.5-5ng/μl最佳。
- 杂交过夜：探针变性后与靶核酸结合，盖玻片防蒸发！
4️⃣ 信号检测
- 洗脱：梯度SSC洗涤去除非特异探针。
- 抗体孵育：抗地高辛抗体-碱性磷酸酶复合物，4℃过夜结合。
- 显色封片：NBT/BCIP显蓝紫色信号，中性红复染+树胶封片。
⚠️注意事项
- 防RNase污染：全程戴手套，玻璃器皿180℃烘烤4小时。
- 探针长度：50-300碱基最佳，过长穿透力差。
- 杂交液配方：甲酰胺降低变性温度，硫酸葡聚糖浓缩探针。
下期神经细胞标志物干货满满敬请期待！
#医学实验 #分子生物学 #浩克生物 #原位杂交 #病理切片