一、实验准备
1、实验动物?
选择4-6周龄、健康的裸鼠，通常为雄性，在无特定病原体（SPF）级动物房适应性饲养3-5天，使其适应环境。
2、细胞准备?
选择目标肿瘤细胞系，在适宜的细胞培养基中进行复苏、传代培养。在细胞对数生长期进行收集，用胰蛋白酶消化后，制备成单细胞悬液，调整细胞浓度至合适范围，如1×10^7-5×10^7个/mL。
3、实验器材和试剂?
准备无菌注射器（1mL）、酒精棉球、碘伏棉球、镊子、剪刀、游标卡尺、电子天平、细胞冻存管、生理盐水、麻醉剂（如异氟烷或戊巴比妥钠）等。
二、接种肿瘤细胞
1、麻醉裸鼠?
采用吸入麻醉（异氟烷）或腹腔注射麻醉（戊巴比妥钠，剂量根据动物体重严格计算，一般为30-50mg/kg），将裸鼠麻醉至失去痛觉反射。
2、接种部位消毒?
通常选择裸鼠的腋下或背部皮下作为接种部位，用酒精棉球和碘伏棉球依次消毒。
3、细胞接种?
使用1mL无菌注射器吸取适量细胞悬液，在消毒部位缓慢注入皮下，每只裸鼠接种体积一般为0.1-0.2mL。接种后轻轻按摩注射部位，使细胞均匀分布。
三、饲养与观察
1、饲养环境?
将接种后的裸鼠置于SPF级动物房饲养，保持温度（22±2）℃、湿度（50±10）%，12小时光照/黑暗循环，提供无菌饲料和饮用水。
2、日常观察?
每天观察裸鼠的精神状态、饮食、活动等一般情况，注意有无感染、脱毛、体重异常变化等。
四、肿瘤测量
1、测量时间?
接种后7-10天左右开始，每周用游标卡尺测量肿瘤的长径（L）和短径（W）2-3次。
2、计算肿瘤体积
按照公式V=0.5×L×W²计算肿瘤体积。当肿瘤体积达到实验预定终点（如1500-2000mm³）或裸鼠出现濒死状态时，终止实验。
五、实验结束处理
1、处死裸鼠?
实验结束时，采用颈椎脱臼法或过量麻醉法处死裸鼠。
2、肿瘤组织处理?
迅速取出肿瘤组织，用生理盐水冲洗，去除血液和杂质，部分组织可用于后续实验，如蛋白免疫印迹检测蛋白表达、免疫组化检测细胞增殖标志物等；部分组织用4%多聚甲醛固定，用于病理切片分析。
3、动物尸体处理⛳️
将处死的裸鼠尸体装入专用的动物尸体袋，按照实验动物废弃物处理规定进行无害化处理。
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1、实验动物?
选择4-6周龄、健康的裸鼠，通常为雄性，在无特定病原体（SPF）级动物房适应性饲养3-5天，使其适应环境。
2、细胞准备?
选择目标肿瘤细胞系，在适宜的细胞培养基中进行复苏、传代培养。在细胞对数生长期进行收集，用胰蛋白酶消化后，制备成单细胞悬液，调整细胞浓度至合适范围，如1×10^7-5×10^7个/mL。
3、实验器材和试剂?
准备无菌注射器（1mL）、酒精棉球、碘伏棉球、镊子、剪刀、游标卡尺、电子天平、细胞冻存管、生理盐水、麻醉剂（如异氟烷或戊巴比妥钠）等。
二、接种肿瘤细胞
1、麻醉裸鼠?
采用吸入麻醉（异氟烷）或腹腔注射麻醉（戊巴比妥钠，剂量根据动物体重严格计算，一般为30-50mg/kg），将裸鼠麻醉至失去痛觉反射。
2、接种部位消毒?
通常选择裸鼠的腋下或背部皮下作为接种部位，用酒精棉球和碘伏棉球依次消毒。
3、细胞接种?
使用1mL无菌注射器吸取适量细胞悬液，在消毒部位缓慢注入皮下，每只裸鼠接种体积一般为0.1-0.2mL。接种后轻轻按摩注射部位，使细胞均匀分布。
三、饲养与观察
1、饲养环境?
将接种后的裸鼠置于SPF级动物房饲养，保持温度（22±2）℃、湿度（50±10）%，12小时光照/黑暗循环，提供无菌饲料和饮用水。
2、日常观察?
每天观察裸鼠的精神状态、饮食、活动等一般情况，注意有无感染、脱毛、体重异常变化等。
四、肿瘤测量
1、测量时间?
接种后7-10天左右开始，每周用游标卡尺测量肿瘤的长径（L）和短径（W）2-3次。
2、计算肿瘤体积
按照公式V=0.5×L×W²计算肿瘤体积。当肿瘤体积达到实验预定终点（如1500-2000mm³）或裸鼠出现濒死状态时，终止实验。
五、实验结束处理
1、处死裸鼠?
实验结束时，采用颈椎脱臼法或过量麻醉法处死裸鼠。
2、肿瘤组织处理?
迅速取出肿瘤组织，用生理盐水冲洗，去除血液和杂质，部分组织可用于后续实验，如蛋白免疫印迹检测蛋白表达、免疫组化检测细胞增殖标志物等；部分组织用4%多聚甲醛固定，用于病理切片分析。
3、动物尸体处理⛳️
将处死的裸鼠尸体装入专用的动物尸体袋，按照实验动物废弃物处理规定进行无害化处理。
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