四氯化碳诱导小鼠肝癌纤维化模型实验流程
实验准备
- 实验动物：通常选用6-8周龄的雄性C57BL/6小鼠，体重在20-25g左右。
- 实验试剂：四氯化碳（CCl₄）、橄榄油或玉米油、多聚甲醛等。
- 实验仪器：1ml注射器、手术器械、天平、离心机等。
实验步骤
1. 动物适应性饲养：将小鼠置于适宜的环境中，如温度22±2℃，湿度50%-60%，12小时光照/黑暗循环，自由饮食饮水，适应性饲养1周。
2. 配制CCl₄溶液：将CCl₄与橄榄油或玉米油按照体积比1:4混合，配制成20%的CCl₄溶液，现用现配。
3. 给药：采用腹腔注射的方式，按照2mL/kg的剂量，每周注射3次。
4. 观察与记录：在造模过程中，每日观察小鼠的活动情况、精神状态、饮食饮水等，每周称量小鼠体重并记录。
5. 取材：连续给药4-8周后，将小鼠麻醉，进行安乐死。然后用镊子夹起腹部皮肤，手术剪剪开皮肤，暴露腹腔，小心分离出整个肝脏，放入生理盐水中清洗，观察肝脏的外观、质地等，并拍照、称重。一部分肝脏组织放入盛有多聚甲醛的EP管中固定保存，用于后续的病理检测，如HE染色、Masson染色等；另一部分放入无菌冻存管中，置于-80℃冰箱保存，用于后续的分子生物学检测，如RNA提取、蛋白检测等。
模型评价
- 血清学指标检测：检测血清中的谷丙转氨酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、透明质酸（HA）、层黏蛋白（LN）、前Ⅲ型前胶原（PC-Ⅲ）及Ⅳ型胶原（Ⅳ-C）等含量，评估肝脏损伤和纤维化程度 。
- 病理检测：对固定好的肝脏组织进行石蜡包埋、切片，然后进行HE染色、Masson染色或天狼星红染色，在显微镜下观察肝组织的病理变化，如肝索排列、肝细胞坏死、炎症细胞浸润、纤维组织增生等，并根据Metavir评分系统评估肝纤维化程度 。#细胞实验 #细胞培养 #细胞 #科研日常 #科研 #实验 #科研学习 #动物实验 #实验室日常 #WB实验
实验准备
- 实验动物：通常选用6-8周龄的雄性C57BL/6小鼠，体重在20-25g左右。
- 实验试剂：四氯化碳（CCl₄）、橄榄油或玉米油、多聚甲醛等。
- 实验仪器：1ml注射器、手术器械、天平、离心机等。
实验步骤
1. 动物适应性饲养：将小鼠置于适宜的环境中，如温度22±2℃，湿度50%-60%，12小时光照/黑暗循环，自由饮食饮水，适应性饲养1周。
2. 配制CCl₄溶液：将CCl₄与橄榄油或玉米油按照体积比1:4混合，配制成20%的CCl₄溶液，现用现配。
3. 给药：采用腹腔注射的方式，按照2mL/kg的剂量，每周注射3次。
4. 观察与记录：在造模过程中，每日观察小鼠的活动情况、精神状态、饮食饮水等，每周称量小鼠体重并记录。
5. 取材：连续给药4-8周后，将小鼠麻醉，进行安乐死。然后用镊子夹起腹部皮肤，手术剪剪开皮肤，暴露腹腔，小心分离出整个肝脏，放入生理盐水中清洗，观察肝脏的外观、质地等，并拍照、称重。一部分肝脏组织放入盛有多聚甲醛的EP管中固定保存，用于后续的病理检测，如HE染色、Masson染色等；另一部分放入无菌冻存管中，置于-80℃冰箱保存，用于后续的分子生物学检测，如RNA提取、蛋白检测等。
模型评价
- 血清学指标检测：检测血清中的谷丙转氨酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、透明质酸（HA）、层黏蛋白（LN）、前Ⅲ型前胶原（PC-Ⅲ）及Ⅳ型胶原（Ⅳ-C）等含量，评估肝脏损伤和纤维化程度 。
- 病理检测：对固定好的肝脏组织进行石蜡包埋、切片，然后进行HE染色、Masson染色或天狼星红染色，在显微镜下观察肝组织的病理变化，如肝索排列、肝细胞坏死、炎症细胞浸润、纤维组织增生等，并根据Metavir评分系统评估肝纤维化程度 。#细胞实验 #细胞培养 #细胞 #科研日常 #科研 #实验 #科研学习 #动物实验 #实验室日常 #WB实验