1. 实验准备阶段（1-2天）：
①细胞复苏与培养：取对数生长期的乳腺癌细胞系（如MDA-MB-231、MCF-7），用含10%胎牛血清的DMEM培养基，在37℃、5%CO₂培养箱中复苏培养，传代2-3次确保细胞活力＞95%；
②实验动物预处理：选取6-8周龄雌性裸鼠（SPF级），适应性饲养1周，实验前1天称重并标记，禁食6小时（不禁水），备用。
2. CTC制备与体内接种阶段（当天）：
①细胞收集与计数：消化培养好的乳腺癌细胞，用PBS洗涤3次，调整细胞浓度至1×10⁶-5×10⁶个/mL，台盼蓝染色验证活力；
②尾静脉注射接种：将裸鼠固定，酒精消毒尾静脉区域，用1mL注射器吸取0.2mL细胞悬液，缓慢注入尾静脉（确保无渗漏），空白对照组注射等量PBS，每组设置5-6只小鼠。
3. 模型监测阶段（1-4周）：
①一般状态观察：每天观察小鼠精神状态、食欲、体重变化及活动情况，记录是否出现消瘦、脱毛、活动迟缓等异常，每周称重1次并记录；
②CTC检测：分别于接种后1周、2周、3周、4周，眼眶取血0.5mL，采用免疫磁珠分选法（如CD44⁺/CD24⁻标志物筛选）或流式细胞术分离并计数CTC，分析CTC数量随时间的变化趋势；
③影像学监测：接种后4周，对小鼠进行小动物活体成像（若细胞提前标记荧光素酶）或Micro-CT检测，观察肺部、肝脏等靶器官是否出现转移灶，初步判断转移模型构建情况。
4. 模型验证与样本收集阶段（第4周末）：
①安乐死与解剖：将小鼠颈椎脱臼安乐死，无菌条件下解剖，观察肺、肝、脑等器官外观，记录是否有肉眼可见的转移结节；
②组织病理学验证：取疑似转移的器官组织，用4%多聚甲醛固定24小时，石蜡包埋、切片，进行HE染色，显微镜下观察组织病理形态，确认是否存在肿瘤细胞浸润（即血行转移）；
③数据整理：统计各组CTC阳性率、靶器官转移率，结合体重变化、病理结果，综合判断乳腺癌血行转移模型是否构建成功。
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①细胞复苏与培养：取对数生长期的乳腺癌细胞系（如MDA-MB-231、MCF-7），用含10%胎牛血清的DMEM培养基，在37℃、5%CO₂培养箱中复苏培养，传代2-3次确保细胞活力＞95%；
②实验动物预处理：选取6-8周龄雌性裸鼠（SPF级），适应性饲养1周，实验前1天称重并标记，禁食6小时（不禁水），备用。
2. CTC制备与体内接种阶段（当天）：
①细胞收集与计数：消化培养好的乳腺癌细胞，用PBS洗涤3次，调整细胞浓度至1×10⁶-5×10⁶个/mL，台盼蓝染色验证活力；
②尾静脉注射接种：将裸鼠固定，酒精消毒尾静脉区域，用1mL注射器吸取0.2mL细胞悬液，缓慢注入尾静脉（确保无渗漏），空白对照组注射等量PBS，每组设置5-6只小鼠。
3. 模型监测阶段（1-4周）：
①一般状态观察：每天观察小鼠精神状态、食欲、体重变化及活动情况，记录是否出现消瘦、脱毛、活动迟缓等异常，每周称重1次并记录；
②CTC检测：分别于接种后1周、2周、3周、4周，眼眶取血0.5mL，采用免疫磁珠分选法（如CD44⁺/CD24⁻标志物筛选）或流式细胞术分离并计数CTC，分析CTC数量随时间的变化趋势；
③影像学监测：接种后4周，对小鼠进行小动物活体成像（若细胞提前标记荧光素酶）或Micro-CT检测，观察肺部、肝脏等靶器官是否出现转移灶，初步判断转移模型构建情况。
4. 模型验证与样本收集阶段（第4周末）：
①安乐死与解剖：将小鼠颈椎脱臼安乐死，无菌条件下解剖，观察肺、肝、脑等器官外观，记录是否有肉眼可见的转移结节；
②组织病理学验证：取疑似转移的器官组织，用4%多聚甲醛固定24小时，石蜡包埋、切片，进行HE染色，显微镜下观察组织病理形态，确认是否存在肿瘤细胞浸润（即血行转移）；
③数据整理：统计各组CTC阳性率、靶器官转移率，结合体重变化、病理结果，综合判断乳腺癌血行转移模型是否构建成功。
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