主要用于研究细胞的迁移和侵袭能力。
Transwell 的核心是一个可以放置在孔板（如24孔板）里的小室，它带有一层通透性的聚碳酸酯膜。
基本原理：将细胞种在膜的上室，下室中加入含有趋化因子（如血清、特定生长因子）的培养液。细胞在趋化因子的“引诱”下，会主动迁移或侵袭，穿过膜上的微孔，到达膜的下表面。
直接目的：检测穿过膜的细胞数量，数量越多，代表细胞的迁移/侵袭能力越强。
实验准备：
细胞饥饿处理：实验前用无血清培养基培养细胞12-24小时，使细胞周期同步化，并去除血清中生长因子的影响。
试剂预热：将培养基、PBS等在37°C水浴中预热。
接种细胞：用胰蛋白酶消化细胞，重悬并计数。用无血清培养基调整细胞密度（需预实验优化）。将细胞悬液加入Transwell小室的上室中。注意：不要产生气泡，且液面不要高于膜，以免因液面差导致细胞被动掉落。在24孔板的孔（即下室）中加入含10%-20% FBS或特定生长因子的培养基，作为趋化源。
阴性对照：下室中只加无血清培养基。
细胞孵育：将小室小心放入孔中，避免上室和下室之间产生气泡，否则会阻断细胞迁移。在37°C、5% CO₂培养箱中孵育数小时至过夜（时间需预实验确定）。
固定与染色：孵育结束后，取出小室，用PBS轻轻清洗1-2次。
固定：将小室放入4%多聚甲醛中，室温固定15-30分钟。
染色：常用0.1%的结晶紫溶液染色15-30分钟，以便于观察和计数。
细胞计数与数据分析：
棉签擦拭：用湿棉签小心地擦去膜上室面未迁移的细胞。
计数：
直接计数法：将膜风干后，倒置在载玻片上，在光学显微镜下随机选择多个视野（如5个），拍照并计数穿过膜的细胞（位于膜的下表面）。
间接计数法：对于结晶紫染色的细胞，可用33%的冰醋酸溶解，然后测量OD值（570nm），通过吸光度值来相对定量细胞数。
对实验组和对照组的计数结果进行统计分析，绘制柱状图。#实验室日常 #科研 #细胞实验 #医学实验 #生物实验 #细胞 #生物医学科研 #科研日常 #细胞培养 #日常分享
Transwell 的核心是一个可以放置在孔板（如24孔板）里的小室，它带有一层通透性的聚碳酸酯膜。
基本原理：将细胞种在膜的上室，下室中加入含有趋化因子（如血清、特定生长因子）的培养液。细胞在趋化因子的“引诱”下，会主动迁移或侵袭，穿过膜上的微孔，到达膜的下表面。
直接目的：检测穿过膜的细胞数量，数量越多，代表细胞的迁移/侵袭能力越强。
实验准备：
细胞饥饿处理：实验前用无血清培养基培养细胞12-24小时，使细胞周期同步化，并去除血清中生长因子的影响。
试剂预热：将培养基、PBS等在37°C水浴中预热。
接种细胞：用胰蛋白酶消化细胞，重悬并计数。用无血清培养基调整细胞密度（需预实验优化）。将细胞悬液加入Transwell小室的上室中。注意：不要产生气泡，且液面不要高于膜，以免因液面差导致细胞被动掉落。在24孔板的孔（即下室）中加入含10%-20% FBS或特定生长因子的培养基，作为趋化源。
阴性对照：下室中只加无血清培养基。
细胞孵育：将小室小心放入孔中，避免上室和下室之间产生气泡，否则会阻断细胞迁移。在37°C、5% CO₂培养箱中孵育数小时至过夜（时间需预实验确定）。
固定与染色：孵育结束后，取出小室，用PBS轻轻清洗1-2次。
固定：将小室放入4%多聚甲醛中，室温固定15-30分钟。
染色：常用0.1%的结晶紫溶液染色15-30分钟，以便于观察和计数。
细胞计数与数据分析：
棉签擦拭：用湿棉签小心地擦去膜上室面未迁移的细胞。
计数：
直接计数法：将膜风干后，倒置在载玻片上，在光学显微镜下随机选择多个视野（如5个），拍照并计数穿过膜的细胞（位于膜的下表面）。
间接计数法：对于结晶紫染色的细胞，可用33%的冰醋酸溶解，然后测量OD值（570nm），通过吸光度值来相对定量细胞数。
对实验组和对照组的计数结果进行统计分析，绘制柱状图。#实验室日常 #科研 #细胞实验 #医学实验 #生物实验 #细胞 #生物医学科研 #科研日常 #细胞培养 #日常分享