平板克隆形成试验是一种体外检测细胞增殖能力和群体依赖性的经典方法。它评估的是单个细胞或一小群细胞在不依赖细胞间高密度接触的情况下，持续分裂并形成一个肉眼可见的“克隆集落”（通常 > 50个细胞）的能力。
实验步骤：
1.制备单细胞悬液：
用胰酶等消化细胞，并轻柔吹打，确保形成单个、分散的细胞悬液，这是实验成功的关键。进行细胞计数。
2.接种细胞：
根据细胞类型和实验目的，将一定数量的细胞稀释后，均匀接种到培养皿或培养板中（通常是6孔板或更大的皿）。（一般：以每孔1000个密度接种于6孔板)
关键点：接种的细胞数量必须非常少，以确保形成的克隆来自于单个细胞，而不是细胞团。通常每个孔接种几百到一千个细胞，具体数量需要通过预实验确定。轻轻晃动培养板，使细胞分布均匀。
3.培养：
将培养板放入37°C、5% CO₂的培养箱中静置培养。培养时间较长，通常为1-3周，期间每7天更换一次新鲜培养基，为细胞提供营养。定期在显微镜下观察克隆的形成情况。
4.染色与固定：
当培养板中出现肉眼可见的克隆时（通常在显微镜下确认克隆大小 > 50个细胞），终止培养。弃去培养基，用PBS小心漂洗1-2次。
固定：加入固定液（如4%多聚甲醛或细胞组织固定液），室温固定10-30分钟。
染色：弃去固定液，加入染色液（最常用的是吉姆萨染液 或 结晶紫染液），染色15-30分钟。
漂洗：用 PBS 缓冲液清洗细胞，空气中自然干燥。
5.计数：
肉眼或显微镜下计数：计数直径大于一定标准（通常默认 >50 μm 或 >50个细胞）的克隆数。
用imgeJ计数并统计。实验独立重复三次。#实验室日常 #科研 #医学实验 #细胞实验 #生物医学科研 #科研人的精神状态 #生物实验 #日常分享 #科研日常 #研究生
实验步骤：
1.制备单细胞悬液：
用胰酶等消化细胞，并轻柔吹打，确保形成单个、分散的细胞悬液，这是实验成功的关键。进行细胞计数。
2.接种细胞：
根据细胞类型和实验目的，将一定数量的细胞稀释后，均匀接种到培养皿或培养板中（通常是6孔板或更大的皿）。（一般：以每孔1000个密度接种于6孔板)
关键点：接种的细胞数量必须非常少，以确保形成的克隆来自于单个细胞，而不是细胞团。通常每个孔接种几百到一千个细胞，具体数量需要通过预实验确定。轻轻晃动培养板，使细胞分布均匀。
3.培养：
将培养板放入37°C、5% CO₂的培养箱中静置培养。培养时间较长，通常为1-3周，期间每7天更换一次新鲜培养基，为细胞提供营养。定期在显微镜下观察克隆的形成情况。
4.染色与固定：
当培养板中出现肉眼可见的克隆时（通常在显微镜下确认克隆大小 > 50个细胞），终止培养。弃去培养基，用PBS小心漂洗1-2次。
固定：加入固定液（如4%多聚甲醛或细胞组织固定液），室温固定10-30分钟。
染色：弃去固定液，加入染色液（最常用的是吉姆萨染液 或 结晶紫染液），染色15-30分钟。
漂洗：用 PBS 缓冲液清洗细胞，空气中自然干燥。
5.计数：
肉眼或显微镜下计数：计数直径大于一定标准（通常默认 >50 μm 或 >50个细胞）的克隆数。
用imgeJ计数并统计。实验独立重复三次。#实验室日常 #科研 #医学实验 #细胞实验 #生物医学科研 #科研人的精神状态 #生物实验 #日常分享 #科研日常 #研究生