abmart T55134F vimentin
图一是wb，图二是免疫荧光！下面我把我的实验步骤和改进注意整理了一下。欢迎大家一起交流 1. 细胞铺板：（以12孔板爬片为例） （1） 用锡箔纸包裹爬片，放进器械盒内，高温高压灭菌 （2） 向12孔板里每个孔滴加一滴完培，无菌镊子夹起爬片放进孔里，再加完培完全润湿孔底 （3） 加入细胞悬液，采用合适方法使之均匀分布（每个人的方法不同，在此不做赘述） 注：提前滴加液滴是为了让爬片更好的贴在孔底；灭菌后的爬片与爬片之间会粘得紧，要耐心，不要把片子夹碎了，也不要夹出2张 2. 弃旧培，PBS润洗3遍（不需要放摇床摇晃） 3. 固定：4%多聚甲醛 室温 15分钟（这一步我查阅过资料：如果目标分子是磷酸化蛋白，则用醇类，不过我自己没有试过，我目前还没有染过磷酸化蛋白的荧光） 4. PBS润洗3遍（不需要放摇床摇晃） 5. 通透：0.5%TritonX-100 室温 20分钟（染膜蛋白不需要通透！即使不通透DAPI也是可以染上的，不要怕，我之前做过） 6. PBS润洗3遍（不需要放摇床摇晃） 7. 封闭：5%BSA(PBS配置) 室温1小时 8. 不需要清洗，直接开始下一步孵育一抗 9. 一抗用5%BSA（PBS）配置，Vimentin abmart [ T55134 ] 稀释比 1:50，4℃孵育2夜（他们家抗体很好用，目前跑WB 和荧光没有踩雷。大家给我点个赞，我要薅试用装） 10. 爬片从冰箱里拿出来复温1小时 11. PBS清洗3遍×5分钟（从这一步开始，所有清洗都要放摇床，转速大概100左右，不要晃太剧烈）（主打充分封闭，充分孵育，充分清洗，费人费力） 12. 二抗 PBS配置 【碧云天-免疫荧光兔二抗 稀释比1：200 】 避光 室温 1小时30分钟 13. PBS清洗3遍×5分钟 14. DAPI染色+封片+防淬灭（abcam小奶瓶），爬片倒扣于载玻片上， 避光放置30分钟 15. 指甲油固定 待其凝固后（大约10分钟），用酒精沾湿棉签，轻柔擦拭爬片背面，准备拍照
#Abmart #abmart抗体试用装 #Vimentin抗体 #成纤维细胞 @Abmart艾比玛特科研桥梁 #WB实验 #免疫荧光
图一是wb，图二是免疫荧光！下面我把我的实验步骤和改进注意整理了一下。欢迎大家一起交流 1. 细胞铺板：（以12孔板爬片为例） （1） 用锡箔纸包裹爬片，放进器械盒内，高温高压灭菌 （2） 向12孔板里每个孔滴加一滴完培，无菌镊子夹起爬片放进孔里，再加完培完全润湿孔底 （3） 加入细胞悬液，采用合适方法使之均匀分布（每个人的方法不同，在此不做赘述） 注：提前滴加液滴是为了让爬片更好的贴在孔底；灭菌后的爬片与爬片之间会粘得紧，要耐心，不要把片子夹碎了，也不要夹出2张 2. 弃旧培，PBS润洗3遍（不需要放摇床摇晃） 3. 固定：4%多聚甲醛 室温 15分钟（这一步我查阅过资料：如果目标分子是磷酸化蛋白，则用醇类，不过我自己没有试过，我目前还没有染过磷酸化蛋白的荧光） 4. PBS润洗3遍（不需要放摇床摇晃） 5. 通透：0.5%TritonX-100 室温 20分钟（染膜蛋白不需要通透！即使不通透DAPI也是可以染上的，不要怕，我之前做过） 6. PBS润洗3遍（不需要放摇床摇晃） 7. 封闭：5%BSA(PBS配置) 室温1小时 8. 不需要清洗，直接开始下一步孵育一抗 9. 一抗用5%BSA（PBS）配置，Vimentin abmart [ T55134 ] 稀释比 1:50，4℃孵育2夜（他们家抗体很好用，目前跑WB 和荧光没有踩雷。大家给我点个赞，我要薅试用装） 10. 爬片从冰箱里拿出来复温1小时 11. PBS清洗3遍×5分钟（从这一步开始，所有清洗都要放摇床，转速大概100左右，不要晃太剧烈）（主打充分封闭，充分孵育，充分清洗，费人费力） 12. 二抗 PBS配置 【碧云天-免疫荧光兔二抗 稀释比1：200 】 避光 室温 1小时30分钟 13. PBS清洗3遍×5分钟 14. DAPI染色+封片+防淬灭（abcam小奶瓶），爬片倒扣于载玻片上， 避光放置30分钟 15. 指甲油固定 待其凝固后（大约10分钟），用酒精沾湿棉签，轻柔擦拭爬片背面，准备拍照
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