样本固定：
从动物或人体取得所需的组织样本
将组织样本放入固定液中，常用的固定液有4%多聚甲醛溶液。一般室温下固定18-24小时
包埋
通过将组织样本嵌入到固体介质中，可以制作出适合在显微镜下观察的薄切片
脱水：在组织样本固定后，需要将其中的水分去除，以便于包埋介质能够充分渗透
透明：脱水后，使用透明剂去除酒精和其他溶剂，使组织样本变得透明
浸蜡：将透明后的组织样本放入温箱中，用石蜡浸泡3次，每次50分钟，以确保石蜡的均匀渗透。
包埋：将浸蜡后的组织样本放入模具中，倒入熔化的石蜡，然后让石蜡冷却凝固
切片
将包埋好的组织块固定在切片机的样本夹上，调整切片机的切片厚度，通常为4-5微米
将切片放在载玻片上，60℃烤片2小时
脱蜡水化
切片首先被置于二甲苯中浸泡，以溶解和去除切片上的石蜡。通常用二甲苯浸泡3次，每次5分钟
抗原修复
通过修复过程暴露被固定时隐藏的抗原表位，提高抗体的结合效率
洗涤：用PBS或TBS等缓冲液洗涤切片，浸泡2次，每次5分钟
封闭
封闭组织切片上非特异性结合位点，防止抗体与这些位点结合，从而减少背景信号
洗涤：封闭结束后，用PBS或TBS等缓冲液洗涤切片，以去除未结合的封闭液和可能存在的杂质
一抗孵育
根据实验目的选择特异性高、亲和力强的一抗
涂覆一抗：将稀释好的一抗均匀涂覆在已封闭的组织切片上，确保抗体能够充分接触组织切片上的抗原。
孵育：将稀释好的一抗均匀滴加在已封闭的组织切片上，放入湿盒中，室温（或37℃）孵育1小时，使一抗与抗原充分结合。
二抗孵育：
滴加与一抗种属匹配的二抗，确保二抗能够充分接触一抗。
孵育：将二抗均匀滴加在组织切片上，放入湿盒中，室温下孵育一定时间（如30分钟），使二抗与一抗充分结合。
洗涤：用PBS或TBS等缓冲液洗涤切片，以去除未结合的二抗和可能存在的杂质
显色
使用适当的显色剂（如DAB）使抗原-抗体复合物显色
复染
使用苏木素等染料对细胞核进行复染，以便在显微镜下更好地观察组织结构
脱水：将复染后的切片通过梯度酒精脱水，以去除水分
透明：使用二甲苯等透明剂使切片变得透明
封片：在切片上滴加适量的中性树胶，然后盖上盖玻片，封片固定
观察：将封好的切片放在显微镜下观察，记录实验结果。#医学生 #医生评职称 #动物实验外包 #细胞实验 #医学生#医生
从动物或人体取得所需的组织样本
将组织样本放入固定液中，常用的固定液有4%多聚甲醛溶液。一般室温下固定18-24小时
包埋
通过将组织样本嵌入到固体介质中，可以制作出适合在显微镜下观察的薄切片
脱水：在组织样本固定后，需要将其中的水分去除，以便于包埋介质能够充分渗透
透明：脱水后，使用透明剂去除酒精和其他溶剂，使组织样本变得透明
浸蜡：将透明后的组织样本放入温箱中，用石蜡浸泡3次，每次50分钟，以确保石蜡的均匀渗透。
包埋：将浸蜡后的组织样本放入模具中，倒入熔化的石蜡，然后让石蜡冷却凝固
切片
将包埋好的组织块固定在切片机的样本夹上，调整切片机的切片厚度，通常为4-5微米
将切片放在载玻片上，60℃烤片2小时
脱蜡水化
切片首先被置于二甲苯中浸泡，以溶解和去除切片上的石蜡。通常用二甲苯浸泡3次，每次5分钟
抗原修复
通过修复过程暴露被固定时隐藏的抗原表位，提高抗体的结合效率
洗涤：用PBS或TBS等缓冲液洗涤切片，浸泡2次，每次5分钟
封闭
封闭组织切片上非特异性结合位点，防止抗体与这些位点结合，从而减少背景信号
洗涤：封闭结束后，用PBS或TBS等缓冲液洗涤切片，以去除未结合的封闭液和可能存在的杂质
一抗孵育
根据实验目的选择特异性高、亲和力强的一抗
涂覆一抗：将稀释好的一抗均匀涂覆在已封闭的组织切片上，确保抗体能够充分接触组织切片上的抗原。
孵育：将稀释好的一抗均匀滴加在已封闭的组织切片上，放入湿盒中，室温（或37℃）孵育1小时，使一抗与抗原充分结合。
二抗孵育：
滴加与一抗种属匹配的二抗，确保二抗能够充分接触一抗。
孵育：将二抗均匀滴加在组织切片上，放入湿盒中，室温下孵育一定时间（如30分钟），使二抗与一抗充分结合。
洗涤：用PBS或TBS等缓冲液洗涤切片，以去除未结合的二抗和可能存在的杂质
显色
使用适当的显色剂（如DAB）使抗原-抗体复合物显色
复染
使用苏木素等染料对细胞核进行复染，以便在显微镜下更好地观察组织结构
脱水：将复染后的切片通过梯度酒精脱水，以去除水分
透明：使用二甲苯等透明剂使切片变得透明
封片：在切片上滴加适量的中性树胶，然后盖上盖玻片，封片固定
观察：将封好的切片放在显微镜下观察，记录实验结果。#医学生 #医生评职称 #动物实验外包 #细胞实验 #医学生#医生