一、实验类型与原理
静态细胞粘附实验
原理：在无外力作用下，量化细胞与基质（或细胞间）的静态结合能力。
应用场景：评估药物对细胞粘附的影响、筛选基质材料、研究胚胎发育中的组织分隔。
示例：将乳腺癌细胞接种于纤连蛋白包被的96孔板，通过结晶紫染色后酶标仪检测吸光度，量化粘附细胞数量。
流动细胞粘附实验
原理：通过可控流体剪切力模拟生理环境（如血管血流），研究细胞动态粘附行为。
应用场景：分析白细胞滚动粘附、血管内皮细胞行为、人工血管材料评估。
示例：在流动腔中以50rpm恒温摇荡培养人脐静脉内皮细胞，3小时后用钙黄绿素-AM检测贴壁细胞荧光强度。
细胞-细胞粘附实验
原理：量化细胞间结合能力，评估药物干预或基因修饰对粘附特性的影响。
典型流程：
将未标记细胞铺于多孔板形成单层基底；
加入荧光标记的待测细胞共孵育；
洗涤后通过残留荧光强度与粘附细胞数量正相关测定相互作用强度。
二、关键操作步骤
基质包被
材料选择：常用胶原蛋白、纤连蛋白、层粘连蛋白，浓度需预实验优化（如纤连蛋白10μg/250μl）。
操作要点：4℃过夜包被后，PBS洗涤3次去除未结合蛋白，1% BSA封闭未包被区域以减少非特异性粘附。
细胞接种与培养
密度控制：根据细胞类型调整（如293T细胞1-4×10⁴个/孔），设置3个复孔以减少误差。
孵育时间：静态实验通常15-60分钟，需通过时间梯度预实验确定最佳粘附时间。
洗涤与固定
洗涤力度：PBS轻柔洗涤3次，避免细胞脱落（可将枪头尖端剪掉一小节以减少液体冲击）。
固定方法：4%多聚甲醛室温固定15分钟，增强细胞结构稳定性。
染色与检测
结晶紫染色：0.1%结晶紫室温染色30分钟，PBS洗涤后加入裂解液（0.5% Triton X-100或2% SDS），酶标仪检测595nm（Triton X-100）或550nm（SDS）吸光度。
荧光检测：钙黄绿素-AM标记活细胞，荧光显微镜或酶标仪检测Ex/Em=494/517nm荧光强度，计算粘附率=（贴壁细胞荧光值/总接种细胞荧光值）×100%。
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静态细胞粘附实验
原理：在无外力作用下，量化细胞与基质（或细胞间）的静态结合能力。
应用场景：评估药物对细胞粘附的影响、筛选基质材料、研究胚胎发育中的组织分隔。
示例：将乳腺癌细胞接种于纤连蛋白包被的96孔板，通过结晶紫染色后酶标仪检测吸光度，量化粘附细胞数量。
流动细胞粘附实验
原理：通过可控流体剪切力模拟生理环境（如血管血流），研究细胞动态粘附行为。
应用场景：分析白细胞滚动粘附、血管内皮细胞行为、人工血管材料评估。
示例：在流动腔中以50rpm恒温摇荡培养人脐静脉内皮细胞，3小时后用钙黄绿素-AM检测贴壁细胞荧光强度。
细胞-细胞粘附实验
原理：量化细胞间结合能力，评估药物干预或基因修饰对粘附特性的影响。
典型流程：
将未标记细胞铺于多孔板形成单层基底；
加入荧光标记的待测细胞共孵育；
洗涤后通过残留荧光强度与粘附细胞数量正相关测定相互作用强度。
二、关键操作步骤
基质包被
材料选择：常用胶原蛋白、纤连蛋白、层粘连蛋白，浓度需预实验优化（如纤连蛋白10μg/250μl）。
操作要点：4℃过夜包被后，PBS洗涤3次去除未结合蛋白，1% BSA封闭未包被区域以减少非特异性粘附。
细胞接种与培养
密度控制：根据细胞类型调整（如293T细胞1-4×10⁴个/孔），设置3个复孔以减少误差。
孵育时间：静态实验通常15-60分钟，需通过时间梯度预实验确定最佳粘附时间。
洗涤与固定
洗涤力度：PBS轻柔洗涤3次，避免细胞脱落（可将枪头尖端剪掉一小节以减少液体冲击）。
固定方法：4%多聚甲醛室温固定15分钟，增强细胞结构稳定性。
染色与检测
结晶紫染色：0.1%结晶紫室温染色30分钟，PBS洗涤后加入裂解液（0.5% Triton X-100或2% SDS），酶标仪检测595nm（Triton X-100）或550nm（SDS）吸光度。
荧光检测：钙黄绿素-AM标记活细胞，荧光显微镜或酶标仪检测Ex/Em=494/517nm荧光强度，计算粘附率=（贴壁细胞荧光值/总接种细胞荧光值）×100%。
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